兔眼视网膜下注射N-甲基右旋天冬氨酸诱导视网膜变性的组织病理学研究

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目的 研究视网膜下注射兴奋性氨基酸N-甲基右旋天冬氨酸(NMDA)对神经细胞变性的作用.方法 取12只1个月龄有色家兔,视网膜下注射10 μl(30 mmol/L)NMDA(溶剂为DMEM-F12),形成视网膜隆起,在注射12、24、48 h及1周后分别处死家兔,取其视网膜组织进行免疫组织化学检测和电镜观察.应用抗Calretinin、Calbindin、PKCα抗体,分别标记视网膜无长突细胞、水平细胞及视杆双极细胞;采用原位缺口末端标记技术(TUNEL)技术标记凋亡细胞.结果 损伤早期(12~24 h),实验组视网膜可见散在细胞核固缩浓染的光感受器细胞,并有无长突细胞和神经节细胞的早期严重变性;中期(48 h)视网膜各层神经元均出现病理性改变;损伤晚期(1周)视网膜各层细胞数目明显减少.损伤早期,TUNEL技术标记的阳性细胞位于视网膜各层.免疫组织化学和形态学计量资料显示视网膜下注射NMDA后,水平细胞、无长突细胞及神经节细胞数目明显减少,视杆双极细胞数目基本无变化.超微结构观察显示有凋亡、坏死、水肿变性及混合型细胞死亡等多种变性形式.结论 视网膜下聚集NMDA时,光感受器细胞、水平细胞、视杆双极细胞、无长突细胞及神经节细胞均表现为视网膜兴奋性毒性反应,与以往体内及体外研究结果显示的仅有内核层神经元死亡情况不同。

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