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目的 研究MTX对RAS蛋白定位改变以及下游信号途径的影响,并探讨MTX抑制人胶质母细胞瘤细胞株U87生长的可能机制.方法 不同浓度的MTX(75nmol/L、375nmol/L、750nmol/L、7,500nmol/L、15,000nmol/L)处理U87细胞后,采用MTT法和FCM法分别检测细胞活力,细胞凋亡率及细胞周期.RAS-GFP和蛋白质印迹法分别检测RAS蛋白的分布定位和其下游MAPK/ERK蛋白的表达水平.采用逆转录病毒法将RAS-GFP融合基因转导至U87细胞,共聚焦显微镜技术能检测到RAS活化后定位分布,与不同的MAKP/ERK信号途径特异性抑制剂(U0126和PD98059)共培养,采用蛋白质印迹法检测MTX对P-P42/P44 MARK蛋白磷酸化水平的影响以及其调控转录因子c-MYC表达水平发的影响.50nmol/L的MTX处理U87细胞后,进一步用FCM法检测细胞表面分子CD47的表达水平.结果 不同浓度的MTX(75nmol/L、375nmol/L、750nmol/L、7,500nmol/L、15,000nmol/L)均能抑制人神经胶质母细胞瘤细胞株U87的增殖,呈剂量依赖性,不同浓度的MTX可将U87细胞阻滞于个G2/S期,并不能直接诱导细胞发生凋亡.转导RAS-GFP融合基因到U87细胞(100％ GFP),同对照组相比,用MTX处理后发现RAS蛋白从细胞膜转移到细胞质,从而通过降低或者抑制P-p42/p44MARK蛋白磷酸化水平(P＜0.05),以及抑制转录因子c-MYC的表达水平(P＜0.05),导致U87细胞生长受到抑制.我们还近一步证明了MTX抑制与神经胶质母细胞瘤生长密切相关的细胞表面分子CD47在不同时间的表达水平.结论 我们首次证明MTX通过改变RAS蛋白定位抑制MAPK/ERK/C-MYC信号导致神经胶质母细胞瘤U87细胞株的生长收到抑制,细胞停滞在G2/S期,提示MTX有可能作为复发胶质瘤患者可选的治疗药物.