【摘 要】
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目的 观察hSav1蛋白高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响,探讨hSav1在Mst1介导的细胞凋亡中的作用.方法 构建蛋白hSav1的载体pCMV-HA-hSav1与蛋白Mst1的载体pcDNA/4TO-Flag-Mst
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤研究所,武汉,430030
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目的 观察hSav1蛋白高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响,探讨hSav1在Mst1介导的细胞凋亡中的作用.方法 构建蛋白hSav1的载体pCMV-HA-hSav1与蛋白Mst1的载体pcDNA/4TO-Flag-Mst1,共转染HeLa细胞.采用相应抗体做二者的免疫共沉淀,以证实蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用;应用细胞免疫荧光共定位,进一步证实二者之间的相互作用.在HeLa细胞中,分别单独或同时转染质粒pcDNA/4TO-Flag-Mstl和pCMV-HA-hSav1,转染36 h后,加入凋亡诱导剂顺铂(50 μmol/L)作用14 h.应用磷脂结合蛋白碘化丙啶(Annexin V/PI)法检测细胞凋亡,观察蛋白hSav1高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响.结果 载体pCMV-HA-hSav1与pcDNA/4TO-Flag-Mst1构建成功,测序结果表明无突变或缺失.免疫共沉淀结果显示,蛋白hSav1可以在Mst1抗体的免疫沉淀物中检测出来,蛋白Mst1可以在hSav1抗体的免疫沉淀物中检测出来.细胞免疫荧光的结果显示,二者的荧光在细胞内存在共定位,并可充分融合.HeLa细胞中,单独Mst1蛋白高表达组的细胞凋亡率为24.5%±2.4%,单独hSav1蛋白高表达组与对照组比较,无明显细胞凋亡.蛋白Mst1和hSav1高表达组的细胞凋亡率为39.3%±4.0%,差异有统计学意义(P
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