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定向诱导基因组局部突变技术（Targeting Induced Local Lesions In Genomes，TILLING）是一种新近发展起来的高通量检测点突变的反向遗传学方法。本研究首次将TILLING技术用于EMS处理的烟草突变体筛选中，通过对正反向荧光引物使用量的摸索，确定了10μL PCR体系中IRDye-700标记的正向引物（1μM）适用量为0.32～0.64μL，IRDye-800标记的反向引物（1μM）适用量1.12～1.6μL；对异源双链CELⅠ酶切体系实验表明，10μL PCR产物