【摘 要】
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目的 鉴定特异性抗丙型肝炎病毒(HCV)核酶与具有细胞核靶向性的U1 snRNA组成的嵌合体在体外切割HCV RNA的活性.方法通过聚合酶链反应及克隆的方法用HCV特异性核酶(Rz)序列取代质粒pBSⅡSK+U1(含有人类野生型U1 snRNA基因全序)中U1 snRNA第三个茎环结构,重组质粒命名为pBSⅡSK+(U1-Rz).再将pBSⅡSK+(U1-Rz)中核酶与U1 snRNA组成的嵌合体
【机 构】
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100011,北京地坛医院,吉林大学第一医院传染科,吉林大学第一医院传染科,杭州市第六人民医院
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目的 鉴定特异性抗丙型肝炎病毒(HCV)核酶与具有细胞核靶向性的U1 snRNA组成的嵌合体在体外切割HCV RNA的活性.方法通过聚合酶链反应及克隆的方法用HCV特异性核酶(Rz)序列取代质粒pBSⅡSK+U1(含有人类野生型U1 snRNA基因全序)中U1 snRNA第三个茎环结构,重组质粒命名为pBSⅡSK+(U1-Rz).再将pBSⅡSK+(U1-Rz)中核酶与U1 snRNA组成的嵌合体基因正向克隆于pGEM-T 载体T7启动子的下游,重组质粒命名为pGEM(U1-Rz).质粒pGEM-(U1 Rz)和pGEM Rzl含有与pGEM-(U1-Rz)相同的核酶序列]体外转录后,转录产物与靶RNAs在一定条件下进行切割反应,电泳后放射自显影.结果 U1 snRNA嵌合体核酶构建成功.嵌合体核酶与核酶对靶RNAs均有切割活性,且二者的切割活性相似.随着时间的延长和工具酶体积比的增加切割效率增加. 结论特异性抗HCV核酶与U1嵌合体在体外具有良好的特异性催化切割活性。
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