【摘 要】
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目的:探讨谷氨酰胺保护肠黏膜屏障功能的作用机制.方法:Caco-2细胞(20-30代)应用含有不同浓度谷氨酰胺(0、0.1、1、4 mmol/L)的DMEM培养液在Transwell上培养21 d,检测跨上皮
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目的:探讨谷氨酰胺保护肠黏膜屏障功能的作用机制.方法:Caco-2细胞(20-30代)应用含有不同浓度谷氨酰胺(0、0.1、1、4 mmol/L)的DMEM培养液在Transwell上培养21 d,检测跨上皮电阻的变化.免疫荧光染色检测紧密连接蛋白occludin的定位、表达.应用不同裂解液制备NP-40可溶性及不溶性蛋白框架,分别进行蛋白印迹杂交检测活性和非活性occludin蛋白的相对含量.结果:与0 mmol/L GLN组比较,补充GLN后,跨上皮电阻明显升高(21.4±0.1,124.5±0.3,173.6±0.2 vs 11.3±0.3,均P<0.05).免疫荧光染色可见0 mmmol/L GLN组occludin呈团状分布于细胞胞质内,随着GLN浓度的增加,occludin阳性荧光染色呈沿细胞膜分布的蜂巢状线性荧光.GLN缺乏不影响65 kDa occludin蛋白的表达,但能降低85 kDa occludin蛋白的表达(1.04±0.03,1.17±0.04,1.29±0.03,1.43±0.06,P<0.05).结论:谷氨酰胺缺乏能够减少活性紧密连接蛋白occludin的表达,增加肠上皮细胞屏障通透性,补充GLN能够阻断这些改变.
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