小鼠KGF基因毛囊特异性表达载体的构建及mESC脂质体悬浮转染条件的优化

来源 :生物技术通报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：wuyan123

【摘要】

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旨在构建小鼠角质细胞生长因子（KGF）真核表达载体pCDsR-UKA,通过脂质体转染法转染小鼠胚胎干细胞（mESC）,并进一步优化其转染条件,最终获得可以正常生长并稳定表达红色荧光蛋白的

【作者】

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梁伟肖红高笑宇杜晓媛汪慧郭旭东刘东军

【机构】

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内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室

【出处】

：

生物技术通报

【发表日期】

：

2011年11期

【关键词】

：

KGF 表达载体胚胎干细胞毛囊 UHS 红色荧光蛋白脂质体转染悬浮法 Keratinocyte growth factor Expression vec

【基金项目】

：

国家转基因新品种培育重大专项（2008ZX08008-002）

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旨在构建小鼠角质细胞生长因子（KGF）真核表达载体pCDsR-UKA,通过脂质体转染法转染小鼠胚胎干细胞（mESC）,并进一步优化其转染条件,最终获得可以正常生长并稳定表达红色荧光蛋白的转KGF基因的ES细胞。利用RT-PCR技术扩增小鼠KGF基因cDNA并构建表达载体pCDsR-UKA（6.6 kb）,经鉴定正确的重组质粒DNA用脂质体包裹后转染mESC。从小鼠成纤维细胞cDNA扩增出891 bp的KGF基因片段与UHS启动子和BGH polyA序列成功重组到pCDsRed2载体中。经酶切和DNA测序验

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