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根据牛分枝杆菌AF2122/97基因组中Rv3872、CFP-IO和ESAT-6全长基因序列,以柔性linker(G4S)3,将三基因序列进行串联,形成表达基因盒(Rv3872-CFPIO-ESAT6,RCE),人工合成并克隆于PUC57转移载体上(PUC57-RCE)。经EcoRI和HindlⅢ双酶切PUC57-RCE,回收纯化RCE片段,与经过相同双酶切的pET-28a载体,于16℃水浴连接过夜,连接产物转化大肠杆菌DH5a感受态细胞,重组质粒经培养鉴定,测序结果证实插入的REC片段序列编码和方向与预