重组体pcDNA3.1(+)-tyr的构建及在小鼠NIH3T3细胞中的表达

来源 :中山大学学报(医学科学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:sbisk
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[目的]克隆酪氨酸酶基因(tyr),构建pcDNA3.1(+)-tyr真核表达重组体,并导入NIH3T3细胞表达.[方法]用RTPCR法从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆tyr全长cDNA片段,利用DNA重组技术将其定向插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)的T7启动子下游,并用脂质体法导入NIH3T3细胞,RT-PCR,酪氨酸酶活性测定及多巴染色法检测tyr的表达.[结果]成功克隆1.74kb的全长tyrcDNA片段,经测序证实与GenBank所报道的序列完全一致,tyr准确克隆入pcDNA3.1(+)的多
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