【摘 要】
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目的筛选并合成CIT基因的最佳siRNA干扰序列，并检测其对人肝癌细胞株SK-Hep-1中CIT基因表达的干扰效率及其对SK-Hep-1人肝癌细胞增殖的影响。方法根据CIT基因序列设计并合成3个siRNA靶点，通过脂质体转染法转染入SK-Hep-1人肝癌细胞，用Real-time PCR和蛋白质印迹法检测其对目的基因CIT的敲减效率。采用细胞免疫化学、共聚焦显微镜观察siRNA干扰后48 h，SK
【机 构】
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重庆医科大学病毒性肝炎研究所 教育部感染性疾病分子生物学重点实验室 400016,重庆医科大学病毒性肝炎研究所 教育部感染性疾病分子生物学重点实验室 400016,重庆医科大学病毒性肝炎研究所 教育部
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目的筛选并合成CIT基因的最佳siRNA干扰序列，并检测其对人肝癌细胞株SK-Hep-1中CIT基因表达的干扰效率及其对SK-Hep-1人肝癌细胞增殖的影响。
方法根据CIT基因序列设计并合成3个siRNA靶点，通过脂质体转染法转染入SK-Hep-1人肝癌细胞，用Real-time PCR和蛋白质印迹法检测其对目的基因CIT的敲减效率。采用细胞免疫化学、共聚焦显微镜观察siRNA干扰后48 h，SK-Hep-1细胞中CIT表达的变化情况。用EdU细胞增殖实验检测siRNA干扰后48 h对SK-Hep-1细胞增殖的影响。两样本均数间比较采用t检验，多样本均数间比较采用单因素方差分析。
结果3条针对不同靶点的干扰序列，蛋白质印迹法检测结果显示，相较于对照组，敲低1、2、3组CIT蛋白的表达水平均降低（P < 0.01），而敲低1组蛋白表达量最低。Real-time PCR检测结果显示，相较于对照组，敲低1、2、3组CIT mRNA表达水平均降低（P < 0.01），而敲低1组mRNA表达量最低。激光共聚焦显微镜从形态学上也证实转染siRNA之后，CIT的表达明显减弱。EdU增殖实验结果显示，转染CIT的siRNA将明显减弱SK-Hep-1肝癌细胞的增殖（P < 0.05）。
结论成功筛选并合成能有效抑制SK-Hep-1肝癌细胞中CIT基因表达的siRNA片段，且能明显抑制SK-Hep-1细胞的增殖。
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