【摘 要】
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目的 观察ghrelin及其受体生长激素分泌素受体1a(GHSR-1a)在高糖环境下对视网膜血管内皮细胞的保护作用.方法 将体外培养的人视网膜血管内皮细胞(HRMECs)分为对照组和高浓度葡萄糖组.对照组细胞在含5.5 mmol·L-1葡萄糖的M199培养基中培养48 h,高浓度葡萄糖组细胞在含30.0 mmol·L-1葡萄糖的M199培养基中培养48 h,采用免疫荧光染色法检测两组细胞中GHSR-1 a的表达.然后另取HRMECs随机分为5组:正常对照(NC)组、高糖(HG)组、HG+ghrelin组、
【机 构】
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710077 陕西省西安市,西安医学院第一附属医院眼科;710077 西安医学院第一附属医院内分泌科;710021 陕西省西安市,西安医学院医学技术学院眼视光教研室
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目的 观察ghrelin及其受体生长激素分泌素受体1a(GHSR-1a)在高糖环境下对视网膜血管内皮细胞的保护作用.方法 将体外培养的人视网膜血管内皮细胞(HRMECs)分为对照组和高浓度葡萄糖组.对照组细胞在含5.5 mmol·L-1葡萄糖的M199培养基中培养48 h,高浓度葡萄糖组细胞在含30.0 mmol·L-1葡萄糖的M199培养基中培养48 h,采用免疫荧光染色法检测两组细胞中GHSR-1 a的表达.然后另取HRMECs随机分为5组:正常对照(NC)组、高糖(HG)组、HG+ghrelin组、HG+ghrelin+siGHSR-1 a组和HG+ghrelin+NC-siGHSR-1 a组,孵育48 h.NC组处理同对照组,HG组处理同高浓度葡萄糖组,HG+ghrelin组细胞在含30.0 mmol·L-1葡萄糖、10.0 nmol·L-1 ghrelin的M199培养基中培养,HG+ghrelin+siGHSR-1a组细胞先转染GHSR-1a-特异性siRNA,24 h后在含30.0 mmol·L-1葡萄糖和10.0 nmol·L-1 ghrelin的M199培养基中培养,HG+ghrelin+NC-siGHSR-1a组细胞先转染非特异性序列,24 h后在含30.0 mmol·L-1葡萄糖和10.0 nmol·L-1 ghrelin的M199培养基中培养.分别采用CCK-8和Annexin-V/FITC-PI凋亡检测试剂盒检测各组HRMECs细胞活力和细胞凋亡情况.Western blot检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达.结果 高浓度葡萄糖组的GHSR-1 a表达低于对照组(P<0.05).NC组、HG组、HG+ghrelin组、HG+ghrelin+siGHSR-1 a组和HG+ghrelin+NC-siGHSR-1a组的细胞活力分别为1.00、69.87％±0.68％、92.31％±3.62％、75.98％±4.67％和90.87％±1.95％,总体比较差异有统计学意义(P0.05)外,其余各组细胞活力比较差异均有统计学意义(均为P<0.05).NC组、HG组、HG+ghrelin组、HG+ghrelin+siGHSR-1 a组和HG+ghrelin+NC-siGHSR-1 a组的细胞凋亡率分别为5.76％±0.36％、20.53％±0.38％、10.84％±0.52％、14.93％±0.18％和11.03％±0.62％,总体比较差异有统计学意义(F=468.88,P0.05)外,其余各组细胞凋亡率比较差异均有统计学意义(均为P<0.05).NC组、HG组、HG+ghrelin组、HG+ghrelin+siGHSR-1 a组和HG+ghrelin+NC-siGHSR-1 a组细胞的Bax蛋白和Bcl-2蛋白相对表达量分别为0.17±0.03和0.64±0.05,0.75±0.04和0.14±0.02,0.38±0.04和0.49±0.08,0.56±0.04和0.33±0.07,0.40±0.06和0.46±0.09,总体比较差异均有统计学意义(均为P0.05)外,其余各组Bax蛋白和Bcl-2蛋白表达比较差异均有统计学意义(均为P<0.05).结论 ghrelin-GHSR-1a系统对高糖环境下的HRMECs功能具有保护作用,并抑制高糖诱导的HRMECs凋亡.
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