内皮祖细胞移植对脓毒症大鼠的治疗作用

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目的

探讨内皮祖细胞(EPCs)移植在细菌内毒素脂多糖(LPS)所致脓毒症中的治疗作用。

方法

选择同遗传背景的清洁级雄性SD大鼠60只,按随机数字表法将大鼠分为对照组、模型组和EPCs移植组3组,每组20只。尾静脉注射LPS 5 mg/kg诱导脓毒症模型,对照组注射等量生理盐水。分离、培养、鉴定大鼠EPCs,用绿色荧光蛋白腺病毒转染标记EPCs。EPCs移植组于LPS注射后1 h经尾静脉注入荧光标记的EPCs悬液,活体成像仪及冰冻切片检测组织中荧光标记的EPCs表达。移植后7 d解剖大鼠经腹主动脉采血,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血白细胞介素(IL-6、IL-10)水平;取肺、肝及肾组织,检测各组织湿/干质量(W/D)比值,苏木素-伊红(HE)染色观察各组织病理学改变,实时反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组织Toll样受体4(TLR4)mRNA表达。

结果

流式细胞仪检测培养第5代时EPCs细胞CD133、CD34的双标记阳性率为99.0%;将标记绿色荧光蛋白的EPCs移植给大鼠后,荧光显示EPCs主要集中在大鼠的胸腹部,血管附近荧光较强。EPCs移植可显著减轻脓毒症大鼠肺、肝及肾组织炎细胞浸润、细胞损伤。与对照组比较,模型组外周血IL-6、 IL-10水平明显升高,各器官组织W/D比值及TLR4 mRNA表达也明显升高。EPCs移植可显著降低模型大鼠外周血IL-6、 IL-10水平〔IL-6(μg/L):2.127±0.118比2.664±0.438,IL-10(ng/L):24.5±3.9比31.5±3.8,均P<0.01〕,降低肺、肝及肾组织W/D比值(肺组织:4.68±0.24比5.48±0.15,肝组织:3.33±0.11比3.94±0.09,肾组织:4.08±0.20比4.84±0.21,均P<0.01),下调肺、肝及肾组织TLR4 mRNA表达(×103,肺组织:782±131比1 136±126,肝组织:39.1±14.0比69.2±8.7,肾组织:52.2±15.2比83.5±17.1,均P<0.01)。

结论

EPCs静脉移植后能成功到达脓毒症大鼠的肺、肝及肾组织,下调促炎因子,使机体恢复促炎/抗炎平衡,显著缓解肺、肝及肾组织损伤。

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