含RIZ1 PR结构域融合蛋白的原核表达、提纯与功能分析

来源 :东南大学学报:医学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户:llqyf
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目的:表达与提纯RIZ1第1个至第200个氨基酸含PR结构域的活性GST融合蛋白质(GST-PR200融合蛋白)。方法:设计引物以含人RIZ1 cDNA全序列的pRIZ1 RH质粒为模板克隆获得目的基因片段,测序核对后经EcoRⅠ与XhoⅠ双酶切,以正确阅读框架插入相同酶切的pGEX-6P-3中,经转染与IPrG诱导表达筛选到阳性大肠杆菌克隆并提纯该融合蛋白质。分别采用SDS—PAGE蛋白电泳法、质谱分析法及组蛋白甲基化转移酶(HMT)测定法鉴定其性质与功能。结果:获得的纯化融合蛋白质相对分子质量约为47
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