论文部分内容阅读
目的 探索一种高效获取基因修饰原代肝细胞的新方法.方法 Wistar大鼠70%切肝建立肝再生模型,术后24 h肝隔离门静脉注射脂质体-质粒DNA复合物(lipofectamine-pEGFP-N1 DNA complexes,lipoplex)转绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因至肝细胞,对照组注射生理盐水(NS).转染后15 d(分为两组,每组5只:切肝并于门静脉注射lipoplex组(L组);切肝并于门静脉注射NS组(N组),均以胶原酶消化、Percoll液梯度离心法获取纯化肝细胞悬液;以NS组为对照并以GFP为荧光标记物,用流式细胞仪(flowcytometry,FCM)分析实验组肝细胞的转染率.结果 FCM分析L组的平均转染率为(3.40±2.09)%.结论肝再生模型Lipoplex门静脉途径灌注转染,可获得稳定的GFP表达率.活体转染离体分离分选法获取基因修饰原代肝细胞是一种高效,可行的新方法。