【摘 要】
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目的构建His-TgPP2C重组质粒,在大肠杆菌E.coil BL21(DE3)中进行融合蛋白的表达、纯化及鉴定。方法利用PCR扩增及基因重组技术,以pcDNA3-TgPP2C为模板,扩增出全长的TgPP2C基
【基金项目】
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广东省自然科学基金资助项目(编号:9151065004000005);中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(编号:21609705,21609317)
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目的构建His-TgPP2C重组质粒,在大肠杆菌E.coil BL21(DE3)中进行融合蛋白的表达、纯化及鉴定。方法利用PCR扩增及基因重组技术,以pcDNA3-TgPP2C为模板,扩增出全长的TgPP2C基因,将所得的PCR产物插入带有His标签的原核表达载体pBAD-His中,得到重组质粒。经XhoⅠ、HindⅢ双酶切及测序鉴定正确后,转化至大肠杆菌E.coli BL21,通过异丙基-β-硫代半乳糖苷诱导表达His-TgPP2C融合蛋白,最后经Ni-NTA柱亲和层析纯化融合蛋白以及Western blot方法鉴定纯化的融合蛋白。结果得到构建好的His-PP2C质粒及纯化的目的融合蛋白His-TgPP2C。结论成功构建pBAD-His-TgPP2C原核表达载体,表达及纯化了His-PP2C融合蛋白,为深入研究TgPP2C蛋白在刚地弓形虫疾病发生发展过程中的作用奠定基础。
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