【摘 要】
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目的：利用基因重组技术,对已有载体pSE380进行改造,获得具有组氨酸标签的新型表达载体。方法：以pSE380载体为出发材料,通过一步反向PCR技术在多克隆位点处添加一个六聚组氨酸纯
【机 构】
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江苏大学食品与生物工程学院,材料化学工程国家重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（“宏基因组甘油脱水酶分子催化机制及分子改造 ”21006041）, 江苏省博士后基金项目（“新型甘油脱水酶基因的克隆表达及三维结构研究 ”0901012B）, 江苏大学基金项目（“新型甘油脱水酶基因的克隆与高效表达 ”08JDG009“一种带有组氨酸标签的新型表达载体的构建 ”07A063）资助
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目的：利用基因重组技术,对已有载体pSE380进行改造,获得具有组氨酸标签的新型表达载体。方法：以pSE380载体为出发材料,通过一步反向PCR技术在多克隆位点处添加一个六聚组氨酸纯化标签,并用该载体对xdh外源基因进行克隆表达及纯化验证。结果：测序结果显示该标签已成功插入,xdh基因克隆表达及纯化表明,镍柱亲和层析完全可以将重组的表达蛋白纯化,并达到电泳纯级别,融合标签并没有影响的该重组酶的功能。结论：通过一步反向PCR技术成功地获得了改造pSE380载体,该技术为载体的相关改造提供了一种方便可行的方法
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