【摘 要】
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目的 本研究以猪鼻支原体表面的可变脂蛋白(vlp)家族为研究对象,鉴定其各成员对宿主细胞的黏附能力.方法 根据已公布的猪鼻支原体vlp家族7种成员的基因序列设计引物,构建重组
【机 构】
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江苏省农业科学院兽医研究所,金宇保灵生物药品有限公司
【基金项目】
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江苏省农业科技自主创新资金项目;江苏省自然科学基金;国家自然科学基金
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目的 本研究以猪鼻支原体表面的可变脂蛋白(vlp)家族为研究对象,鉴定其各成员对宿主细胞的黏附能力.方法 根据已公布的猪鼻支原体vlp家族7种成员的基因序列设计引物,构建重组表达质粒pET-32a(+)/vlp,筛选获得阳性克隆.重组工程菌经IPTG诱导表达目的蛋白,经镍柱亲和层析获得7种纯化的vlp重组蛋白.利用间接免疫荧光法及微孔板定量法分别对vlp各个成员的黏附功能进行鉴定.结果 成功构建了7种重组表达质粒pET-32a(+)/vlp,获得阳性重组工程菌.经IPTG诱导及镍柱亲和层析纯化,获得了较纯的7种vlp重组蛋白.间接免疫荧光及微孔板黏附定量试验检测结果显示,重组蛋白vlpA、vlpB、vlpC、vlpE、vlpG可黏附PK细胞,而重组vlpD和vlpF蛋白黏附能力不明显.结论 本研究成功构建了猪鼻支原体7种vlp的重组蛋白,并对其黏附功能进行了初步鉴定,证明部分vlp属于猪鼻支原体的黏附因子.
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