应用在大肠杆菌中表达的猪2型圆环病毒ORF2蛋白建立一种ELISA诊断方法

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根据GenBank中猪2型圆环病毒(PCV2)序列(AY035820),设计1对引物,并以包含PCV2全基因组的重组质粒pT-PCV为模板,扩增出含ORF2全基因的片段(709 bp),回收PCR产物,将其克隆入pMD18-T载体,获得重组质粒pTORF2,并对其进行序列测定.重组质粒经Bal Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切,回收ORF2基因,将其插入pGEX-KG的Sma Ⅰ和Sal Ⅰ位点间,构建原核表达质粒pGEXORF2,阳性重组质粒转化E.coli BL21(DE3),进行原核表达.用此表达产物包被酶标板
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