【摘 要】
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研究了重组菌BL21-HTa-cgkZ产κ-卡拉胶酶的分离纯化技术.在发酵罐中制备粗酶液,将粗酶液沉淀、阴离子交换层析、超滤浓缩和葡聚糖凝胶过滤层析,得到高纯度的κ-卡拉胶酶.通
【机 构】
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中国海洋大学食品科学与工程学院 山东青岛266000
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研究了重组菌BL21-HTa-cgkZ产κ-卡拉胶酶的分离纯化技术.在发酵罐中制备粗酶液,将粗酶液沉淀、阴离子交换层析、超滤浓缩和葡聚糖凝胶过滤层析,得到高纯度的κ-卡拉胶酶.通过对沉淀剂、沉淀时间、沉淀pH的单因素试验确定κ-卡拉胶酶的最优沉淀条件,即:沉淀剂40％的乙醇,沉淀时间4h,沉淀pH 6.0.通过各级分离纯化,得到聚丙烯酰胺凝胶电泳分子质量为62 ku的条带,经LC-MS/MS鉴定,确定该条带为含有κ-卡拉胶酶的条带.测定纯化后的κ-卡拉胶酶酶活,结果显示,κ-卡拉胶酶的比活力为94.23 U/mg,纯化倍数12.33倍.重组菌BL21-HTa-cgkZ发酵产生的κ-卡拉胶酶,经各级分离纯化,得到高纯度的κ-卡拉胶酶,为卡拉胶酶的食品工业化应用奠定了基础.
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