【摘 要】
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目的 探讨自噬在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中对NLRP3炎症小体激活的调控作用.方法 将分离培养的Kupffer细胞(KCs)随机分为对照组、棕榈酸(PA)组、PA+雷帕霉素组(自噬激活组)
【机 构】
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重庆奉节县人民医院肝胆外科,重庆,404600;重庆医科大学附属第二医院肝胆外科,重庆,400010
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目的 探讨自噬在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中对NLRP3炎症小体激活的调控作用.方法 将分离培养的Kupffer细胞(KCs)随机分为对照组、棕榈酸(PA)组、PA+雷帕霉素组(自噬激活组)和PA+渥曼青霉素组(自噬抑制组).收集细胞及培养基上清液,通过qPCR与Western Blotting技术检测四组KCs中自噬和NLRP3炎症小体相关基因的mRNA及蛋白表达水平,通过ELISA技术检测KCs培养基上清液中促炎因子IL-1β的水平.再将20只C57BL/6小鼠随机分为对照组和NASH组,通过HE染色观察两组的肝脏组织病理学变化,qPCR与Western Blotting技术检测肝组织相关基因和蛋白的表达情况.结果 PA组自噬相关基因Atg5、Atg7、Beclin-1和NLRP3炎症小体相关基因NLRP3、ASC、Caspase-1的mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.01);LC3Ⅱ/LC3Ⅰ转化、Beclin-1、NLRP3、ASC和Caspase-1的蛋白表达水平也明显高于对照组(P<0.01).自噬激活组自噬相关基因mRNA表达水平高于PA组(P<0.05),NLRP3炎症小体相关基因mRNA表达水平低于PA组(P<0.05);LC3Ⅱ/LC3Ⅰ转化和Beclin-1的蛋白表达水平高于PA组(P<0.05);NLRP3、ASC和Caspase-1的蛋白表达水平低于PA组(P<0.05).自噬抑制组自噬相关基因和蛋白表达水平低于PA组(P<0.05),NLRP3炎症小体相关基因和蛋白表达水平明显高于PA组(P<0.01).结论 在PA刺激下,激活自噬可以抑制KCs中NLRP3炎症小体的激活和IL-1β的分泌,缓解炎症反应,而NASH过程中自噬功能受损,失去对NLRP3炎症小体激活的限制作用.
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