【摘 要】
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目的 研究长链非编码RNA反义胰岛素样生长因子2(LncRNA IGF2-AS)对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 实时荧光定量PCR(qPCR)检测人肺癌细胞系H1299、A549、SPC-A-1、NCI-H446和正常肺表皮细胞HPL-1中IGF2-AS、微小RNA-370-3p(miR-370-3p)表达.在H1299细胞中转染si-IGF2-AS,观察沉默IGF2-AS表达在H1299细胞增殖和凋亡中的作用.噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测细
【机 构】
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武汉市第三医院胸外科,湖北 武汉 430060
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目的 研究长链非编码RNA反义胰岛素样生长因子2(LncRNA IGF2-AS)对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 实时荧光定量PCR(qPCR)检测人肺癌细胞系H1299、A549、SPC-A-1、NCI-H446和正常肺表皮细胞HPL-1中IGF2-AS、微小RNA-370-3p(miR-370-3p)表达.在H1299细胞中转染si-IGF2-AS,观察沉默IGF2-AS表达在H1299细胞增殖和凋亡中的作用.噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、磷酸化(p)-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和p-AKT蛋白表达.startbase预测结合双荧光素酶报告基因实验分析IGF2-AS和miR-370-3p的靶向关系.将si-IGF2-AS和anti-miR-370-3p共转染入H1299细胞,研究抑制miR-370-3p表达对沉默IGF2-AS表达诱导的H1299细胞增殖和凋亡的影响.结果 与HPL-1细胞比较,肺癌细胞系H1299、A549、SPC-A-1、NCI-H446中IGF2-AS表达明显上调(P<0.05),miR-370-3p表达显著下调(P<0.05).沉默IGF2-AS表达显著降低H1299细胞48 h、72 h的细胞活性、CyclinD1、CDK4、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT蛋白表达(P<0.05),明显提高H1299细胞凋亡率、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达(P<0.05),对PI3K、AKT蛋白水平无明显影响.IGF2-AS靶向调控miR-370-3p的表达.抑制miR-370-3p表达逆转了沉默IGF2-AS表达抑制H1299细胞增殖、CyclinD1、CDK4、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT蛋白表达的作用及逆转了其促进细胞凋亡、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达的作用.结论 LncRNA IGF2-AS通过靶向miR-370-3p调控AKT信号通路,从而影响肺癌细胞增殖和凋亡.
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