目的研究降低Twist1表达可否改变鼻咽癌细胞系HNE1对紫杉醇的敏感性。方法用包含Twist1小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）序列的表达质粒转染HNE1细胞，以新霉素（400μg/ml）筛选阳性克隆，采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）和蛋白印迹法鉴定Twist1蛋白的低表达。通过Annexin V-异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate，FITC）-碘化丙啶（propidium iodide，PI）双标法和观察DNA降解的方法分析si—Twist1 HNE1细胞对紫杉醇的敏感性，采用实时PCR技术分析凋亡相关基因的表达，流式细胞周期分析和四甲基偶氮唑蓝（MTT）方法分析降低Twist1表达是否影响HNE1细胞增殖。结果Annexin V—FITC—PI双标法检测结果显示，10ng/ml紫杉醇处理后，si—Twist1 HNE1细胞的凋亡率为40.2%，显著高于对照siRNA组的24.3%，差异有统计学意义（t=56.999，P=0.000）；恢复Twist1蛋白的表达，紫杉醇引起的凋亡率在低Twist蛋白表达组为44.80%±4.80%（x±s，下同），在高表达组为27.00%±2.91%，差异有统计学意义（t=4.374，P=0.049）。实时PCR实验结果显示，紫杉醇处理的HNE1细胞中si—Twist组凋亡相关蛋白B淋巴细胞（bcl）-2的相对表达量为0.28±0.05，显著低于对照siRNA组的0.57±0.08，差异有统计学意义（t=6.710，P=0.021）；而bax和bel-XL基因的转录水平没有明显改变（t值分别为2.000和1.502，P值均>0.05）。MTT实验和流式细胞术检测显示Twist表达降低没有影响HNE1细胞增殖（P值均>0.05）。结论降低Twist1表达可能是通过诱导凋亡提高了细胞对化疗药物敏感性，提示Twist蛋白可望成为一项新的鼻咽癌治疗靶标。
降低Twist1表达可以增加鼻咽癌细胞系HNE1对紫杉醇的敏感性
【摘 要】
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目的研究降低Twist1表达可否改变鼻咽癌细胞系HNE1对紫杉醇的敏感性。方法用包含Twist1小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）序列的表达质粒转染HNE1细胞，以新霉素（400μg/ml）筛选阳性克隆，采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）和蛋白印迹法鉴定Twist1蛋白的低表达。通过Annexin V-异硫氰酸荧光素（fluorescein isothi
【机 构】
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辽宁省金秋医院耳鼻咽喉科,沈阳110016,辽宁省金秋医院耳鼻咽喉科,沈阳110016,辽宁省金秋医院耳鼻咽喉科,沈阳110016,辽宁省友谊医院耳鼻咽喉科,辽宁省金秋医院耳鼻咽喉科,沈阳110016
【出 处】
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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志
【发表日期】
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2009年44期
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