【摘 要】
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为构建抗鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）的细菌展示单链抗体（scFv）库并筛选出具有高亲和力和中和活性的scFv。本研究从IBDV免疫鸡的法氏囊提取总RNA,采用RT-PCR的方法分别扩增鸡抗体的VH和VL编码序列,插入含有（Gly4Ser）3linker的pTlinker载体中,再将VH-linker-VL片段亚克隆到细菌展示载体pBSD中。以FITC标记的VP2蛋白为诱饵,通过流式细胞术筛选出
【机 构】
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东北农业大学生命科学学院/生物制药教研室
【基金项目】
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国家自然科学基金青年科学基金项目（31001084）； 黑龙江省博士后科研启动基金项目（LBH-Q09162）；
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为构建抗鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）的细菌展示单链抗体（scFv）库并筛选出具有高亲和力和中和活性的scFv。本研究从IBDV免疫鸡的法氏囊提取总RNA,采用RT-PCR的方法分别扩增鸡抗体的VH和VL编码序列,插入含有（Gly4Ser）3linker的pTlinker载体中,再将VH-linker-VL片段亚克隆到细菌展示载体pBSD中。以FITC标记的VP2蛋白为诱饵,通过流式细胞术筛选出5株阳性scFv,其氨基酸同源性为82.16%~87.27%。将5株scFv基因分别插入原核表达载体pET-27b（+）中,构建重组表达质粒pET-IBDV-scFv。将其转化大肠杆菌Rosetta进行诱导和表达,该5株scFv相对分子质量均约为28 ku。此外,利用纯化的scFv包被于ELISA检测板中作为扑捉抗体,检测结果显示scFv对VP2蛋白和不同IBDV株均具有特异性结合能力。而且通过体外中和试验结果表明,仅有一株scFv具有病毒中和活性,可以有效阻断IBDV（B87株）对鸡胚成纤维细胞（DF1）的感染。该研究结果为进一步研制IBDV治疗性抗体奠定了基础。
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