【摘 要】
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为了制备抗牛妊娠相关糖蛋白（bPAG）单克隆抗体，本试验提纯妊娠母牛子叶bPAG,免疫小鼠后进行细胞电融合，通过ELISA、Western blot方法对抗bPAG单克隆抗体进行筛选。结果显示：获得5株bPAG特异性强、灵敏度高的单克隆抗体，抗体最高效价为1∶256 000,亲和力最高可达到3.75×10~7 L/mol, 5株单克隆抗体均能识别天然bPAG蛋白。采用高碘酸钠法对单抗标记辣根过氧化
【基金项目】
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吉林省科技厅技术攻关项目（20190301088 NY）；
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为了制备抗牛妊娠相关糖蛋白（bPAG）单克隆抗体，本试验提纯妊娠母牛子叶bPAG,免疫小鼠后进行细胞电融合，通过ELISA、Western blot方法对抗bPAG单克隆抗体进行筛选。结果显示：获得5株bPAG特异性强、灵敏度高的单克隆抗体，抗体最高效价为1∶256 000,亲和力最高可达到3.75×10~7 L/mol, 5株单克隆抗体均能识别天然bPAG蛋白。采用高碘酸钠法对单抗标记辣根过氧化物酶（HRP）,将最佳配对抗体用于建立双抗夹心ELISA方法，对64个血清样本进行检测。结果显示：以10H2作为捕获抗体与HRP-5G1配对建立的双抗夹心ELISA方法检测bPAG阳性和阴性血清样本，与爱德士牛早孕检测试剂盒比较符合率达95.2%。结果表明，本试验运用细胞电融合法制备的抗bPAG单克隆抗体可应用于建立双抗夹心ELISA体系，为下一步bPAG检测试剂盒的研制提供技术支持。
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