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【摘 要】欧盟已2010年7月批准Nycomed公司罗氟司特（roflumilast，Daxas）上市，用于慢性阻塞性肺疾病（COPD）的治疗。本实验建立反相高效液相色谱法测定罗氟司特原料药中罗氟司特的含量。方法：采用奥泰公司C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），甲醇-乙睛-0.005mol/L甲酸铵溶液（pH3.5）（25∶45∶35），检测波长为250nm，流速为1.0ml/min，柱温为35℃。罗氟司特在8～112μg·mL-1范围内呈良好的线性关系（r=0.9999）。罗氟司特平均回收率分别为99.3%。结论：本法简便、准确，可用于罗氟司特原料药中罗氟司特的含量测定。
【关键词】罗氟司特原料药；含量；测定
欧盟已2010年7月批准Nycomed公司罗氟司特（roflumilast，Daxas）上市，用于慢性阻塞性肺疾病（COPD）的治疗[1-3]。罗氟司特适用于有频繁加重病史的成人患者慢性支气管炎相关严重慢性阻塞性肺疾病的维持治疗[4-6]。罗氟司特是十多年来首次获得欧盟批准的新一类慢性阻塞性肺疾病治疗药物[7-8]。罗氟司特选择性抑制磷酸二酯酶4，进而抑制如慢性阻塞性肺疾病和哮喘等呼吸道疾病对肺组织造成的损伤。慢性阻塞性肺疾病是一种破坏性的肺部疾病，是以不完全可逆的气流受限为特征的疾病，气流受限通常呈进行性发展并与肺对有害颗粒或气体的异常炎症反应有关[9-12]。本文采用高效液相法对罗氟司特原料药中的罗氟司特的进行了含量测定。
1.仪器与试药
1.1仪器
FL2200-2高效液相色谱仪（浙江福立分析仪器有限公司）；JK-LC液相色谱柱温箱（北京京科瑞达科技有限公司）；B03001-004在线脱气机（上海笛柏实验设备有限公司）；SCQ-1020超声波清洗器（上海声彦超声仪器有限公司）；ABS220-4分析天平（德祥科技有限公司）；RE-5220旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；TU-1901 双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。
1.2色谱柱
奥泰公司C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）。
1.3对照品
罗氟司特 购自中国药品生物制品检定所。
1.4试剂
甲醇（湖北拓楚慷元医药化工有限公司）、磷酸（武汉大华伟业医药化工有限公司）、乙睛（湖北拓楚慷元医药化工有限公司）、甲酸铵（衢州瑞尔丰化工有限公司）、磷酸二氢钾（湖北拓楚慷元医药化工有限公司）、庚烷磺酸钠（武汉大华伟业医药化工有限公司）。
1.5试药
罗氟司特原料药。
2.测定方法确定
2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：甲醇-乙睛-0.005mol/L甲酸铵溶液（pH3.5）（25∶45∶35），检测波长：250nm，流速：1.0ml·min-1。柱温：35℃。理论板数按罗氟司特峰计算应不得低于3000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取罗氟司特对照品适量，置容量瓶中，加甲醇制成每1mL含20μg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取罗氟司特原料药精密称定，研细，精密称取适量，加入甲醇20mL，超声处理（240W，40kHz）10分钟，放冷，滤过，将滤液转移至50毫升容量瓶内，用甲醇定容，即得。
2.4专属性试验
分别取经酸破坏、碱破坏、氧化破坏的样品，按上述色谱条件测定，结果结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5精密度试验
精密称取罗氟司特对照品适量，加甲醇使溶解，制成浓度为20μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.75%，表明本方法精密度良好。
2.6对照品的线性考察
精密称取罗氟司特对照品10mg，置25ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0.2、0.4、0.6、1.2、1.6、2.0、2.4、2.8mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，罗氟司特在8～112μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7重现性试验
称取同一批的罗氟司特原料药样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.56%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8准确度试验
精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的罗氟司特对照品，上述方法进行测定，计算回收率，平均回收率分别为99.3%，RSD为0.65%。
2.9样品稳定性试验
取同一批罗氟司特原料药样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、2、4、6、8、10小时，精密吸取供试品溶液10μl 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定罗氟司特原料药中罗氟司特的RSD=0.79%。结果表明供试品10小时内稳定。
2.10样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定罗氟司特原料药三批样品中罗氟司特的含量，结果三批样品的含量分别为99.6%、99.5%、99.5%。
3.讨论
分别考察甲醇-乙睛-0.005mol/L甲酸铵溶液（pH3.5）（35∶45∶25），甲醇-乙睛-水（20∶40∶40），甲醇-乙睛-0.005mol/L甲酸铵溶液（pH3.5）（25∶45∶35），0.05mol·L-1磷酸二氢钾-0.0025mol·L-1庚烷磺酸钠溶液-乙腈（5：5：2），甲醇-水-磷酸（49：51：0.2）不同比例的流动相，结果以甲醇-乙睛-0.005mol/L甲酸铵溶液（pH3.5）（25∶45∶35）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用，甲醇-乙睛-0.005mol/L甲酸铵溶液（pH3.5）（25∶45∶35）为流动相。2011年2月28日，罗氟司特经美国FDA批准上市，用于慢性阻塞性肺炎（COPD）的治疗。罗氟司特发展潜力巨大。本实验建立了罗氟司特原料药含量的测定方法。本法简便、准确，可用于罗氟司特原料药中罗氟司特的含量测定。
【参考文献】
[1]冯桂山，宋宁，段争，吴雅莉.罗氟司特治疗慢性阻塞性肺疾病药理作用的临床前研究现况[J].临床荟萃，2011（04）.
[2]王敬敬，董金华.罗氟司特[J].中国药物化学杂志，2011（04）.
[3]乔力松.罗氟司特：慢性阻塞性肺病治疗研究进展[J].中国实用医药，2011（26）.
[4]夏训明.美国FDA批准治疗慢性阻塞性肺病新药罗氟司特（roflumilast）[J].广东药学院学报，2011（02）.
[5]FDA批准罗氟司特治疗COPD[J].中国社区医师，2011（10）.
[6]FDA批准罗氟司特治疗慢性阻塞性肺病[J].临床合理用药杂志，2011（27）.
[7]韩伟，周新.慢性阻塞性肺疾病的治疗新选择——罗氟司特[J].世界临床药物，2011（07）.
[8]钟永刚，陈国华，李昂，李素义.罗氟司特的合成[J].中国医药工业杂志，2011（12）.
[9]谢强敏，陈季强，孙建刚，季华，赵晓燕，汤慧芳，陈俊春，范星，邓杨梅.选择性PDE4抑制剂RP001作用及机制研究[A].中国药理学会制药工业专业委员会第十一届学术会议论文摘要汇编[C].2004.
[10]王雅娟.卡介苗防治哮喘作用研究及新型PDE4抑制剂Zl-n-91抗COPD作用的初步探讨[D].浙江大学，2009.
[11]张虞安，胡卓逸，赵烨，蔡惠民.苄基异喹啉类化合物D20抑制钙调素激活磷酸二酯酶的研究[J].生物化学与生物物理进展，1993（01）.
[12]吴芃.磷酸二酯酶5及其抑制剂在药理学和治疗学上的进展[J].中华男科学杂志，2008（10）.
【关键词】罗氟司特原料药；含量；测定
欧盟已2010年7月批准Nycomed公司罗氟司特（roflumilast，Daxas）上市，用于慢性阻塞性肺疾病（COPD）的治疗[1-3]。罗氟司特适用于有频繁加重病史的成人患者慢性支气管炎相关严重慢性阻塞性肺疾病的维持治疗[4-6]。罗氟司特是十多年来首次获得欧盟批准的新一类慢性阻塞性肺疾病治疗药物[7-8]。罗氟司特选择性抑制磷酸二酯酶4，进而抑制如慢性阻塞性肺疾病和哮喘等呼吸道疾病对肺组织造成的损伤。慢性阻塞性肺疾病是一种破坏性的肺部疾病，是以不完全可逆的气流受限为特征的疾病，气流受限通常呈进行性发展并与肺对有害颗粒或气体的异常炎症反应有关[9-12]。本文采用高效液相法对罗氟司特原料药中的罗氟司特的进行了含量测定。
1.仪器与试药
1.1仪器
FL2200-2高效液相色谱仪（浙江福立分析仪器有限公司）；JK-LC液相色谱柱温箱（北京京科瑞达科技有限公司）；B03001-004在线脱气机（上海笛柏实验设备有限公司）；SCQ-1020超声波清洗器（上海声彦超声仪器有限公司）；ABS220-4分析天平（德祥科技有限公司）；RE-5220旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；TU-1901 双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。
1.2色谱柱
奥泰公司C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）。
1.3对照品
罗氟司特 购自中国药品生物制品检定所。
1.4试剂
甲醇（湖北拓楚慷元医药化工有限公司）、磷酸（武汉大华伟业医药化工有限公司）、乙睛（湖北拓楚慷元医药化工有限公司）、甲酸铵（衢州瑞尔丰化工有限公司）、磷酸二氢钾（湖北拓楚慷元医药化工有限公司）、庚烷磺酸钠（武汉大华伟业医药化工有限公司）。
1.5试药
罗氟司特原料药。
2.测定方法确定
2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：甲醇-乙睛-0.005mol/L甲酸铵溶液（pH3.5）（25∶45∶35），检测波长：250nm，流速：1.0ml·min-1。柱温：35℃。理论板数按罗氟司特峰计算应不得低于3000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取罗氟司特对照品适量，置容量瓶中，加甲醇制成每1mL含20μg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取罗氟司特原料药精密称定，研细，精密称取适量，加入甲醇20mL，超声处理（240W，40kHz）10分钟，放冷，滤过，将滤液转移至50毫升容量瓶内，用甲醇定容，即得。
2.4专属性试验
分别取经酸破坏、碱破坏、氧化破坏的样品，按上述色谱条件测定，结果结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5精密度试验
精密称取罗氟司特对照品适量，加甲醇使溶解，制成浓度为20μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.75%，表明本方法精密度良好。
2.6对照品的线性考察
精密称取罗氟司特对照品10mg，置25ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0.2、0.4、0.6、1.2、1.6、2.0、2.4、2.8mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，罗氟司特在8～112μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7重现性试验
称取同一批的罗氟司特原料药样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.56%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8准确度试验
精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的罗氟司特对照品，上述方法进行测定，计算回收率，平均回收率分别为99.3%，RSD为0.65%。
2.9样品稳定性试验
取同一批罗氟司特原料药样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、2、4、6、8、10小时，精密吸取供试品溶液10μl 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定罗氟司特原料药中罗氟司特的RSD=0.79%。结果表明供试品10小时内稳定。
2.10样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定罗氟司特原料药三批样品中罗氟司特的含量，结果三批样品的含量分别为99.6%、99.5%、99.5%。
3.讨论
分别考察甲醇-乙睛-0.005mol/L甲酸铵溶液（pH3.5）（35∶45∶25），甲醇-乙睛-水（20∶40∶40），甲醇-乙睛-0.005mol/L甲酸铵溶液（pH3.5）（25∶45∶35），0.05mol·L-1磷酸二氢钾-0.0025mol·L-1庚烷磺酸钠溶液-乙腈（5：5：2），甲醇-水-磷酸（49：51：0.2）不同比例的流动相，结果以甲醇-乙睛-0.005mol/L甲酸铵溶液（pH3.5）（25∶45∶35）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用，甲醇-乙睛-0.005mol/L甲酸铵溶液（pH3.5）（25∶45∶35）为流动相。2011年2月28日，罗氟司特经美国FDA批准上市，用于慢性阻塞性肺炎（COPD）的治疗。罗氟司特发展潜力巨大。本实验建立了罗氟司特原料药含量的测定方法。本法简便、准确，可用于罗氟司特原料药中罗氟司特的含量测定。
【参考文献】
[1]冯桂山，宋宁，段争，吴雅莉.罗氟司特治疗慢性阻塞性肺疾病药理作用的临床前研究现况[J].临床荟萃，2011（04）.
[2]王敬敬，董金华.罗氟司特[J].中国药物化学杂志，2011（04）.
[3]乔力松.罗氟司特：慢性阻塞性肺病治疗研究进展[J].中国实用医药，2011（26）.
[4]夏训明.美国FDA批准治疗慢性阻塞性肺病新药罗氟司特（roflumilast）[J].广东药学院学报，2011（02）.
[5]FDA批准罗氟司特治疗COPD[J].中国社区医师，2011（10）.
[6]FDA批准罗氟司特治疗慢性阻塞性肺病[J].临床合理用药杂志，2011（27）.
[7]韩伟，周新.慢性阻塞性肺疾病的治疗新选择——罗氟司特[J].世界临床药物，2011（07）.
[8]钟永刚，陈国华，李昂，李素义.罗氟司特的合成[J].中国医药工业杂志，2011（12）.
[9]谢强敏，陈季强，孙建刚，季华，赵晓燕，汤慧芳，陈俊春，范星，邓杨梅.选择性PDE4抑制剂RP001作用及机制研究[A].中国药理学会制药工业专业委员会第十一届学术会议论文摘要汇编[C].2004.
[10]王雅娟.卡介苗防治哮喘作用研究及新型PDE4抑制剂Zl-n-91抗COPD作用的初步探讨[D].浙江大学，2009.
[11]张虞安，胡卓逸，赵烨，蔡惠民.苄基异喹啉类化合物D20抑制钙调素激活磷酸二酯酶的研究[J].生物化学与生物物理进展，1993（01）.
[12]吴芃.磷酸二酯酶5及其抑制剂在药理学和治疗学上的进展[J].中华男科学杂志，2008（10）.