【摘 要】
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旨在应用自杀质粒重组技术,构建阴沟肠杆菌乳酸脱氢酶突变株,为进一步提高乙偶姻的产量和扩大菌株选择范围奠定基础.利用双酶切的方法将同源片段插入到自杀质粒pKR6K中,构建
【机 构】
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黑龙江大学生命科学学院微生物重点实验室,哈尔滨150080;黑龙江大学农业微生物技术教育部工程研究中心,哈尔滨150500
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旨在应用自杀质粒重组技术,构建阴沟肠杆菌乳酸脱氢酶突变株,为进一步提高乙偶姻的产量和扩大菌株选择范围奠定基础.利用双酶切的方法将同源片段插入到自杀质粒pKR6K中,构建出ldh基因敲除质粒,然后利用细菌接合的方法敲除E.cloacae的ldh基因.成功克隆出两段E.cloacae乳酸脱氢酶基因的同源序列,长度分别为526 bp,通过序列比对分析,E.cloacae乳酸脱氢酶基因序列相似性为100％.通过对E.cloacae进行乳酸脱氢酶基因的敲除,成功构建一株ldh缺失重组菌株E.cloacae △ ldh,同时2,3-丁二醇提高6.8％,乙酸提高了 24.3％.E.cloacae乳酸脱氢酶缺失工程菌株构建成功,对利用微生物法工业化生产乙偶姻奠定基础.
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