【摘 要】
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目的 初步探讨兔脂肪间充质干细胞(ADSCs)HIF-1α促进ADSCs成软骨分化的作用机制.方法 观察动态压力联合低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因转染对兔脂肪间充质干细胞(ADSCs)HIF-1表达的影响.采用I型胶原酶消化法,分离、纯化、扩增兔ADSCs.构建稳定表达pcDNA3.1-IGF-1的细胞株,以5×107/ml的密度接种于壳聚糖/明胶复合支架材料上,分组培养:A组(空白对照组
【机 构】
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目的 初步探讨兔脂肪间充质干细胞(ADSCs)HIF-1α促进ADSCs成软骨分化的作用机制.方法 观察动态压力联合低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因转染对兔脂肪间充质干细胞(ADSCs)HIF-1表达的影响.采用I型胶原酶消化法,分离、纯化、扩增兔ADSCs.构建稳定表达pcDNA3.1-IGF-1的细胞株,以5×107/ml的密度接种于壳聚糖/明胶复合支架材料上,分组培养:A组(空白对照组)接种未转染基因的脂肪间充质干细胞,B组(IGF-1组)接种稳定转染胰岛素样生长因子1的脂肪间充质干细胞,C组(压力组)与D组(压力+IGF-1组)分别为A、B组的细胞/支架复合物于压力型生物反应器中动态培养(2%at 0.1Hz),连续培养7 d.进行形态学观察,MrTT法绘制细胞增殖曲线,并应用Di1荧光标记观察细胞在支架上的分布情况.比较组织工程软骨中糖胺聚糖(GAG)含量和相关基因(IGF-1,HIF-1α,Ⅱ型胶原和Sox-9)相对表达的差异.结果 形态学观察,MTr,Dil荧光标记,GAG含量测定以及实时聚合酶链反应结果均显示A组＜C组＜B组＜D组.实验证实单纯基因转染组的HIF-1α、Sox-9等基因表达水平和GAG含最明显高于单纯压力组,而二者联合培养则能够获得更为显著的效果,其结果远大于二者简单的加合.结论 三维立体培养条件下,动态压力与IGF-1基因转染联合作用明显促进细胞自身分泌内源性IGF-1;IGF-1与动态压力刺激均明显上调兔ADSCs HIF-1α的表达水平,并且二者存在协同作用.HIF-1α表达上调对促进兔ADSCs成软骨分化、增殖以及分泌细胞外基质均具有重要作用。
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