【摘 要】
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为研究转录抑制因子Bmi-1基因的功能及其作用机制,根据Bmi-1基因已知序列,设计合成一对引物,上下游引物分别加入XhoI和ClaI的酶切位点,用反转录PCR(RT-PCR)方法 从人红白血病
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为研究转录抑制因子Bmi-1基因的功能及其作用机制,根据Bmi-1基因已知序列,设计合成一对引物,上下游引物分别加入XhoI和ClaI的酶切位点,用反转录PCR(RT-PCR)方法 从人红白血病细胞株(K562)总RNA中扩增编码Bmi-1的基因片段(1017bp),插入克隆载体pMD18-T,构建pMD18-Bmi1载体,经限制性核酸内切酶谱证实后,再克隆至逆转录病毒载体pLNCX2中,构建pLNCX2- Bmi1真核表达载体,并经测序证实.然后以pLNCX2- Bmi-1为模板,物扩增Bmi-1基因起始密码子及编码锌指结构区域上下171bp长度的核苷酸片段,并反向连接于表达载体(pLNCX2)上,得到反义Bmi-1真核表达载体并经测序证实,为进一步的基因转移和基因治疗研究奠定基础.
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