【摘 要】
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分析2013-2019年中国西北部分省区不同基因亚型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原基因Erns的分子特征,了解其遗传演化规律.从甘肃、青海、宁夏规模化牛场送检的疑似牛病毒性腹泻发病牛150份EDTA抗凝血提取总RNA,利用RT-PCR扩增病毒基因组Ens-E1区,克隆测序后比对,构建系统进化树进行遗传演化关系分析.利用牛肾细胞MDBK对检出的不同基因亚型BVDV进行分离,并鉴定其生物型.RT-PCR扩增结果表明,BVDV总体阳性率为37.33％,其中甘肃省、青海省、宁夏回族自治区BVDV阳性率分别为37
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,兰州730046;宁夏农林科学院动物科学研究所,银川750002;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,兰州730
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分析2013-2019年中国西北部分省区不同基因亚型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原基因Erns的分子特征,了解其遗传演化规律.从甘肃、青海、宁夏规模化牛场送检的疑似牛病毒性腹泻发病牛150份EDTA抗凝血提取总RNA,利用RT-PCR扩增病毒基因组Ens-E1区,克隆测序后比对,构建系统进化树进行遗传演化关系分析.利用牛肾细胞MDBK对检出的不同基因亚型BVDV进行分离,并鉴定其生物型.RT-PCR扩增结果表明,BVDV总体阳性率为37.33％,其中甘肃省、青海省、宁夏回族自治区BVDV阳性率分别为37.68％、35.71％、40.00％.获得56份Erns-E1DNA,克隆测序获得33条不同的Erns序列,长度均为681 bp,分析表明流行株分属10个BVDV基因亚型:BVDV-1a(2株)、BVDV-1b(5株)、BVDV-1c(1 株)、BVDV-1d(3株)、BVDV-1m(11 株)、BVDV-1o(1 株)、BVDV-1p(4株)、BVDV-1q(4株)、BVDV-1v(1 株)、BVDV-2a(1 株).分离获得BVDV-1a亚型、BVDV-1b亚型、BVDV-1v亚型、BVDV-2a亚型分离株各1株,BVDV-1 d亚型分离株2株,均为非致细胞病变型.各亚型株间Erns基因核苷酸相似性以BVDV-1a～1d经典亚型株(79.8％～85.9％)或1m～1q及1v新亚型株(81.0％～87.3％)较高,以 BVDV-1 m和BVDV-1p流行株亚型间相似性最高(87.3％).各亚型株Erns基因编码蛋白的RNA酶活性位点以及双链RNA作用基序(139KKGK142)保守,但Erns第26位糖基化位点(26 NRSL)在1m～1q、1v亚型株移位(24 NVSR).首次以Erns核苷酸序列构建系统进化树,结果显示1m～1q及1v等亚型BVDV株在进化上关系较为密切.本研究首次选用Erns靶标基因对甘肃、青海、宁夏部分省区牛源BVDV株进行同源性及系统进化分析,发现10个基因亚型流行株,以1m亚型株最为普遍,1m～1q及1v等亚型株亲缘关系密切.
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