探究肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（alveolar epithelial type Ⅱ cells, AEC-Ⅱ）及紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-4表达的影响。

体外培养大鼠AEC-Ⅱ细胞，将细胞分为正常对照组，TNF-α24 h、48 h、72 h组。对照组用含胎牛血清的DME F12培养液培养细胞，TNF-α各组用TNF-α（10 ng/mL）分别刺激细胞24、48、72 h。共培养结束后采用透射电镜鉴定并观察细胞超微结构的变化。MTT法测定细胞增殖抑制情况。流式细胞仪测定细胞早期凋亡率。免疫荧光法观察各组细胞紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-4表达分布，实时荧光定量PCR法测定各组细胞ZO-1、Claudin-4 mRNA水平的变化，Western blot测定紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-4表达的变化。多组样本间均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验。方差不齐时则用秩转换的非参数检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

透射电镜下可见对照组大鼠AEC-Ⅱ细胞内含有大小不等的特征性板层小体，TNF-α各组板层小体逐渐排空，视野下可见凋亡细胞。TNF-α各组细胞的早期凋亡率及增殖抑制率均较对照组降低（均P<0.05）。共聚焦显微镜下观察到ZO-1沿细胞膜呈线状分布，Claudin-4沿细胞膜呈散点状分布，TNF-α各组ZO-1的荧光强度减弱，连续性被破坏，线性结构断裂，甚至消失。Claudin-4的荧光强度减弱，密度降低。TNF-α24 h组ZO-1的转录及表达均低于对照组，但差异无统计学意义（P>0.05）。TNF-α48 h及72 h组细胞ZO-1的mRNA（0.28±0.06；0.13±0.07）与对照组比较明显降低（P<0.01），且两组蛋白水平（0.44±0.09；0.2±0.01）均低于对照组（0.69±0.12）。与对照组比较，TNF-α各组细胞Claudin-4转录（24 h：0.16±0.03，48 h：0.04±0.01，72 h：0.01±0.00 vs 1.00±0.00）及表达水平（24 h：0.49±0.08，48 h：0.34±0.05，72 h：0.04±0.01 vs 0.96±0.13）明显降低（均P<0.05），且随着时间延长呈递减趋势。

TNF-α通过损伤大鼠AEC-Ⅱ和下调细胞紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-4的表达分布，损伤肺上皮屏障。