【摘 要】
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目的:探讨一种从人尿液中分离培养尿源干细胞(hUSCs),并诱导分化为软骨细胞的方法。方法:通过离心贴壁法从健康成人尿液中分离、培养hUSCs,采用CCK8法检测hUSCs的细胞增殖
【基金项目】
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贵州省高层次创新型人才千人计划资助项目[GZSYQCC(2015)002];贵州省人民医院博士基金[GZSYBS(2017)04]
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目的:探讨一种从人尿液中分离培养尿源干细胞(hUSCs),并诱导分化为软骨细胞的方法。方法:通过离心贴壁法从健康成人尿液中分离、培养hUSCs,采用CCK8法检测hUSCs的细胞增殖能力;成骨诱导3周时,使用茜素红染色检测hUSCs的成骨分化能力;成脂诱导2周时,使用油红O染色检测hUSCs成脂分化能力;甲苯胺蓝染色从细胞形态检测其成软骨分化能力,Aggrecan和CollagenⅡ免疫组组织化学染色检测其成软骨分化能力。结果:原代培养第7~10天时,可观察到细胞形态为短梭或多角形的典型hUSC形态表现,第10~15天时hUSCs细胞呈成纤维细胞样的细长形改变;CCK8结果显示,hUSCs符合典型的细胞增殖曲线规律;成骨诱导分化3周时,茜素红染色后可见红色钙结节;成脂诱导分化2周时,油红O染色后可见红色脂滴;成软骨诱导分化3周时,甲苯胺蓝染色阳性,提示细胞可分泌大量蛋白多糖;Aggrecan和CollagenⅡ结果均显示,hUSCs胞浆及周围可见大量棕色颗粒。结论:运用离心贴壁法获取的hUSCs具有良好的增殖特性和多项分化潜能,具有良好的软骨细胞分化能力。
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