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目的构建靶向表皮生长因子受体（EGFR）的短发卡状RNA（shRNA）质粒表达载体并进行鉴定。方法设计两个小分子干扰RNA（siRNA）序列，体外合成DNA模板引物，与Pgenesil-1质粒构建成编码shRNA的表达载体，进行酶切鉴定和测序，再转染人大肠癌LoVo细胞，进行荧光摄像和G418抗性筛选。结果构建的质粒表达载体完全符合设计要求，转染成功的细胞在荧光显微镜下显示为绿色，G418可以筛选出阳性克隆。结论成功构建了编码EGFR—shRNA的质粒表达载体，并可以进行稳定筛选。