【摘 要】
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根据GenBank中的副猪嗜血杆菌(HPS)的infB基因的序列(DQ781808.1),利用分子生物学软件Premier 5.0设计一对特异性引物,建立基于SYBR Green I荧光定量PCR检测HPS的技术。试验
【机 构】
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青岛农业大学动物科技学院; 山东省农业科学院畜牧兽医研究所; 山东农业大学动物科技学院;
【基金项目】
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国家转基因生物新品种培育科技重大专项(2009ZX08009-143B);山东省自然科学基金重点项目(Z2007D06);山东省中青年科学家科研奖励基金(2009BSC02016);山东省留学回国人员科技活动择优资助项目(鲁人社函[2009]341号)
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根据GenBank中的副猪嗜血杆菌(HPS)的infB基因的序列(DQ781808.1),利用分子生物学软件Premier 5.0设计一对特异性引物,建立基于SYBR Green I荧光定量PCR检测HPS的技术。试验采用煮沸法从HPS培养物中提取DNA,进行PCR扩增。将鉴定正确的目的基因片段克隆入pMD18-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为阳性标准品。结果表明,该方法对HPS具有良好的特异性,不与其它猪源细菌发生交叉反应,其敏感性比常规PCR高100倍,而且非常稳定,批间与批内重复试验变异系数均小于2.5%。临床应用表明本方法的建立实现了对HPS的快速诊断和定量的检测。
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