【摘 要】
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目的:采用酵母双杂交系统寻找与人肝再生增强因子(hALR)相互作用的蛋白质,探讨ALR的作用机理.方法:构建hALR 诱饵质粒pGBKT7-hALR,醋酸锂法转化AH109酵母菌,转化菌在SD/-Trp-
【机 构】
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解放军第458医院传染病中心,华南理工大学生物工程系
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目的:采用酵母双杂交系统寻找与人肝再生增强因子(hALR)相互作用的蛋白质,探讨ALR的作用机理.方法:构建hALR 诱饵质粒pGBKT7-hALR,醋酸锂法转化AH109酵母菌,转化菌在SD/-Trp-His培养基上培养及滤纸法β一半乳糖苷酶活性检测排除自身激活作用后,与人肝cDNA文库质粒预转化的酵母菌Y187进行接合试验,接合产物在QDO培养基上筛选,阳性克隆进一步在含X-α-Gal的QDO平板上鉴定,X-α-Gal活性呈阳性的克隆,进行PCR及酶切鉴定排除完全相同克隆,进一步进行回交试验排除假阳性
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