【摘 要】
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采用RT-PCR方法克隆绵羊TLR4基因的一种新型剪接体形式sTLR4,将sTLR4与EGFP构建融合蛋白表达载体.用EcoR I和Sma I分别双酶切质粒pEGFP-N1和sTLR4基因的PCR产物,采用T4连接酶
【基金项目】
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转基因生物新品种培育重大专项项目;
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采用RT-PCR方法克隆绵羊TLR4基因的一种新型剪接体形式sTLR4,将sTLR4与EGFP构建融合蛋白表达载体.用EcoR I和Sma I分别双酶切质粒pEGFP-N1和sTLR4基因的PCR产物,采用T4连接酶进行连接,将质粒转4ETOP10菌株,挑取阳性克隆采用AgeI和VspI对质粒进行双酶切鉴定.经鉴定的质粒采用电击方法转染胎儿成纤维细胞,在激光共聚焦显微镜下观察sTLR4蛋白在成纤维细胞中的定位情况.结果表明:构建的融合蛋白pEGFP-N1-sTLR4能够在成纤维细胞中正常工作,且sTLR4-EGFP融合蛋白可以在细胞膜上表达.
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