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目的
建立一种多重PCR方法用于莫西沙星耐药的艰难梭菌鉴定和初步基因分型。
方法根据艰难梭菌slpA可变区间核苷酸序列的差异设计5种slpA基因型(gr、hr、fr、gc08和078)的特异性PCR引物，同时加入检测艰难梭菌管家基因磷酸甘油醛异构酶基因tpi的种特异性引物，构建多重PCR方法；利用9种肠道常见的正常或致病菌验证多重PCR方法的特异性，利用46株分属于11个slpA基因型的艰难梭菌参考菌株来验证方法的检测和分型能力；利用建立的多重PCR方法检测39株莫西沙星耐药的临床菌株，以slpA测序分型法为参照方法，评估该方法的临床实用性。
结果多重PCR检测9种肠道常见的正常或致病菌tpi和5种slpA基因型均为阴性；46株艰难梭菌参考菌株tpi均为阳性，36株分属于5种靶slpA基因型(gr、hr、fr、gc08和078)的菌株被正确分型，10株分属于其他6种基因型的参考菌株均无法分型。39株莫西沙星耐药的艰难梭菌临床菌株tpi均为阳性，32株检出具体基因型，其中22株为slpA基因型gc08，6株为hr，2株为fr，2株为078，与slpA测序分型结果一致；7株多重PCR无法分型，slpA测序分型结果显示其基因型均不包含在多重PCR分型范围内。
结论成功建立一种简单、快捷、临床实验室适用的艰难梭菌检测，且能够分辨出5种slpA基因型的多重PCR方法；莫西沙星耐药的艰难梭菌主要为slpA基因型gc08。