含甘露糖异构酶基因植物表达载体的构建

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目的:构建了以manA基因为选择标记的植物表达载体.方法:从大肠杆菌DH5α中克隆出manA基因,连接到质粒pCAMBIA1301的Xho Ⅰ位点,替换hpt基因,通过酶切和PCR检测了插入片段的正确性,使用Xba Ⅰ和Hinid Ⅲ酶切Gateway载体(pGWCBF)获得含有P35S - T35S - attR1 - attR2 - CmR - ccdB的结构域,将其插入到表达载体pCAMBIA1301的相应位点中,获得中间表达载体pCAMBIA1301 -manA - GW,使用Gateway载体的BP反应与LR反应,将转录因子CBF基因片段整合到载体中.结果:酶切结果表明以甘露糖异构酶基因(manA)为选择标记的植物表达载体pCAMBIA1301 -manA - CBF已经构建完成.结论:将构建好的载体用液氮冻融法转化到农杆菌中,可以用于葡萄的遗传转化研究,为将来获得安全的转基因抗寒植株奠定基础.
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