【摘 要】
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目的:体外转录合成银松素合酶(PS)基因地高辛标记反义RNA探针.方法:通过双酶切把PS cDNA全长序列接到pBlueskriptⅡKS(+)的多克隆位点上;同时,经由NCBI比对确定PS cDNA的特异
【机 构】
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农业部甘蔗生理生态与遗传改良重点开放实验室,福建师范大学,发育与神经生物学福建省高等学校重点实验室
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目的:体外转录合成银松素合酶(PS)基因地高辛标记反义RNA探针.方法:通过双酶切把PS cDNA全长序列接到pBlueskriptⅡKS(+)的多克隆位点上;同时,经由NCBI比对确定PS cDNA的特异序列,设计含有SalⅠ和XbaⅠ这2个酶切位点的上、下游引物,用PCR法扩增含有该位点的目的片段,并连接到pBlueskriptⅡKS(+)的多克隆位点上;最后利用pBlueskriptⅡKS(+)上的启动子T7,用T7 RNA聚合酶在体外转录合成地高辛标记PS全长及特异序列的反义RNA探针.结果:通过对构建探针的单、双酶切,PCR及电泳鉴定,表明成功合成了PS基因地高辛标记的全长及特异序列的反义RNA探针.结论:RNA探针的合成为后续马尾松PS基因表达的RNA原位杂交研究打下了基础.
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