论文部分内容阅读
目的
为提高诱导γ珠蛋白（γ globin）基因激活的效率，研究DNA羟甲基化酶（DNA双加氧酶）基因Tet2在诱导γ珠蛋白激活表达过程中的作用，为β地中海贫血病的治疗提供理论依据。
方法在人红白血病细胞系K562中用短发夹RSNA（shRNA）干扰的方法下调Tet2表达后，用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测干扰后细胞基因组5-羟甲基胞嘧啶（5hmC）水平的变化，并用亚硫酸盐测序法检测γ珠蛋白上CG位点羟甲基化状态，最后用荧光定量实时PCR检测药物5-氮胞苷诱导γ珠蛋白激活表达量和γ珠蛋白相关转录因子Nfe4和Klf1表达量的变化。
结果不做处理的对照组K562细胞基因组5hmC水平为0.14%，sh-Tet2组（Tet2下调后）约为0.03%；被5-氮胞苷激活后，Tet2下调组（即sh-Tet2+5-氮胞苷组）γ珠蛋白的表达量为未下调组（5-氮胞苷组）的55%左右，但γ珠蛋白上CG位点的羟甲基化状态没有发现明显变化。同时，γ珠蛋白相关转录因子Nfe4和Klf1的表达量变化显著，sh-Tet2组（Tet2下调后）Nfe4为对照组的约20%，Klf1为对照组的3.5倍。
结论Tet2可维持K562基因组5hmC水平，对γ珠蛋白的激活表达起到一定的调控作用，其作用机制有可能通过调控其上游转录因子来间接发挥调节作用，由此推测Tet2是一个潜在的β地中海贫血的治疗靶点。