携带大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组慢病毒载体的构建及体外表达检测

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目的构建携带大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组慢病毒载体,并检测其体外表达目的基因的能力。方法应用基因克隆技术将大鼠BDNF基因克隆入慢病毒载体pFuw中,经过PCR、酶切和测序鉴定后,与包装质粒共转染293T细胞,制备并收集携带BDNF基因的慢病毒,重组病毒感染体外培养Hela细胞,利用实时定量PCR、蛋白质免疫印迹方法检测BDNF的表达情况,观察病毒转染效果。结果PCR、酶切和测序鉴定,成功克隆了pFUW-BDNF重组子。所包装的重组慢病毒对Hela细胞的感染效率〉90%,实时定量PCR、蛋白
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