【摘 要】
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目的 研究二氢叶酸还原酶 (DHFR ,D)与谷氨酰胺合成酶 (GS ,G)单基因和二氢叶酸还原酶与谷氨酰胺合成酶 (DHFR +GS ,DG)双基因筛选扩增系统对外源基因表达的影响。方法 选
【机 构】
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西安交通大学; 中国预防医学科学院病毒学研究所; 石家庄华北制药厂; 中国预防医学科学院病毒学研究所 710061.西安; 710061.西安;
【基金项目】
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“八六三”高科技发展计划资助项目 ( 86 3 0 2 0 7 0 2 0 1,86 3 10 2 0 7 0 1 0 2 );国家杰出青年基金资助课题 ( 395 2 5 0 0 1)
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目的 研究二氢叶酸还原酶 (DHFR ,D)与谷氨酰胺合成酶 (GS ,G)单基因和二氢叶酸还原酶与谷氨酰胺合成酶 (DHFR +GS ,DG)双基因筛选扩增系统对外源基因表达的影响。方法 选择N端部分TPO基因 (T1 84)作为靶基因 ,以DHFR和GS基因作为筛选及扩增基因构建重组质粒pDCT1 84与pGCT1 84,将两种质粒分别转染CHOdhfr- 细胞形成单基因筛选扩增系统 ,两种质粒共转染CHOdhfr-细胞形成双基因筛选扩增系统。在双基因筛选扩增系统中设计三种药物加压方式。第一种为DG方式 :先用DHFR系统压力 (MTX)筛选 ,再用GS系统压力 (MSX)筛选 ;第二种为GD方式 :先用GS系统压力筛选 (MSX) ,再用DHFR系统压力筛选 (MTX) ;第三种为共加压方式 :同时利用DHFR与GS系统压力筛选 (MTX +MSX)。通过比较T1 84基因拷贝数及表达水平来研究DHFR和GS双基因筛选扩增系统对外源基因表达的影响。结果 T1 84基因拷贝数及表达水平在DG双基因筛选扩增系统不同药物加压方式中 ,均比DHFR或GS单基因筛选扩增系统高 ,但不同药物选择方式没有明显差异。结论 采用DHFR +GS双基因筛选扩增系统共加压方式是提高CHOdhfr- 细胞表达外源基因的有效途径
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