【摘 要】
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目的 构建单纯痕疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)UL27和UL29双基因shRNA慢病毒表达载体,并检测其在HEK293细胞中的表达.方法 针对HSV-2 UL27、UL29基因,各筛选
【机 构】
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广东食品药品职业学院,广东广州512000;珠海市人民医院儿科,广东珠海519000
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目的 构建单纯痕疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)UL27和UL29双基因shRNA慢病毒表达载体,并检测其在HEK293细胞中的表达.方法 针对HSV-2 UL27、UL29基因,各筛选干扰效率最佳的shRNA片段相连接,构建双基因共表达慢病毒载体,并转染HEK293细胞作为干扰组,另设空白对照组(不做任何处理)和阴性对照组(转染不针对任何基因的慢病毒载体).转染48或24 h后接种HSV-2,RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中目的基因mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测各组细胞的存活率.结果 干扰组UL27和UL29基因mRNA的表达抑制率可达(78.61±2.14)％和(84.86±1.52)％,同时gB和ICP8蛋白的相对表达量明显下降(P均＜0.05),细胞的存活明显率提高(P均＜0.05).结论 构建的HSV-2 UL27、UL29双基因shRNA重组慢病毒表达载体能在HEK293细胞中表达,为后续HSV-2的基因治疗奠定了实验基础.
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