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摘 要：该文采用反相高效液相色谱法测定芝麻油中的苯并（a）芘，分别用Cleanert BAP固相萃取柱和自制固相萃取柱净化，荧光检测器进行检测。结果表明，使用Cleanert BAP固相萃取柱的重现性优于自制的固相萃取柱，回收率在91%～100.5%之间，RSD为3.1%，且操作简便，结果准确可靠。
关键词：苯并（a）芘 Cleanert BAP固相萃取柱 芝麻油 反相高效液相色谱法
中图分类号：O65 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2014）04（b）-0102-02
Sesame oil benzo （a） pyrene is determinated with reversed phase high performance liquid chromatographic method
DAI Qifeng XU Min
（HeXian technology of quality supervision in AnHui province，AnHui Maanshan，238200）
Abstract：Sesame oil benzo（a）pyrene is determinated with reversed phase high performance liquid chromatographic method， purged by Cleanert BAP Solid phase extraction column and Self-control Solid phase extraction column，detected by the fluorescence detector.The result shows that the reproducibility by Cleanert BAP Solid phase extraction column is better than by Self-control Solid phase extraction column，the tecoverie is range from 91% to 100.5%，the RSD is 3.1%.This is a good method that the operation is convenient and the result is accurate and reliable
Keywords：benzo（a）pyrene Cleanert BAP Solid phase extraction column sesame oil reversed phase high performance liquid chromatographic method
苯并（a）芘是由五个苯环构成的多环芳香烃物质，它和亚硝胺、黄曲霉毒素是世界公认的三大致癌物质。目前已发现的致癌性多环芳香烃及其致癌性的衍生物已达200多种[1]，多环芳香烃是一类含有多个苯环的芳香族化合物，是煤炭、木材、石油等有机物不完全燃烧的产物，多环芳香烃类化合物能阻断细胞间的联系，会导致癌细胞的进一步增殖扩散，这可能是多环芳香烃物质具有致癌性的原因之一。
芝麻油在生产过程中可能因环境污染或原材料带入或加工时温度过高而产生苯并（a）芘[2-5]，GB2716《食用植物油卫生标准》中明确规定了苯并（a）芘的限值为不大于10 μg/kg，所以苯并（a）芘的测定是食品检验机构最常见的检测项目之一，现在的国标方法GB/T22509-2008前处理较为繁锁，复杂的前处理不仅耗时耗力、污染环境，且容易引入较多的误差和不确定度，影响结果的准确性，因此建立一种快速准确和科学可靠的植物油中苯并（a）芘含量的检测方法具有积极的意义。
1 实验材料与方法
1.1 实验原理
样品经石油醚溶解，通过中性氧化铝固相萃取柱吸附，用石油醚试剂洗脱苯并（a）芘，采用反相高效液相色谱法分离，荧光检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量[6]。
1.2 试剂和材料
Cleanert BAP固相萃取柱：22g/60 mL
水：符合GB/T6682规定的二级水要求
甲醇：色谱纯
石油醚：色谱纯（沸程35～60 ℃）
乙腈：色谱纯
四氢呋喃：色谱纯
中性氧化铝：100-200目
无水硫酸钠：分析纯
苯并（a）芘标准溶液：5.25 ug/mL，2L/支，中国计量科学研究院制。
乙腈四氢呋喃混合溶液（9+1）：90 mL乙腈和10 mL四氢呋喃的混和溶液
芝麻油：辖区内监督抽查样品
1.3 仪器和器皿
Waters 2690高效液相色谱仪：配2475荧光检测器和120位自动进样器（美国沃特氏公司）
RE-52AA旋转蒸发仪：控温40～50 ℃范围内
VX200涡旋混合器：0～3000转
BS224S分析天平：感量为0.000 g
样品瓶：2 mL，配有可密封的盖子
1.4 实验方法
1.4.1 标准工作溶液的配制
将5.25 μg/mL的苯并（a）芘标准溶液用甲醇稀释到100 mL，配成105 ng/mL苯并（a）芘标准贮备液。再取105 ng/mL苯并（a）芘标准贮备溶液0 mL、1 mL、2 mL、4 mL、5 mL稀到50 mL，配成0 ng/mL、2.1 ng/mL、4.2 ng/mL、8.4 ng/mL、10.5 ng/mL的标准工作液。 1.4.2 样品前处理
溶解：用电子天平准确称取不超过0.300 g的油样，用5 mL的石油醚溶解并于涡旋混合器上充分混匀。
活化：用约30 mL石油醚，将固相萃取柱预先活化，活化过程直到固相萃取柱末端石油醚自然滴下约5 mL左右为止。
上样：将溶解好的油样添加到预先活化好的固相萃取柱中，注意操作过程中筛板不能干涸。
洗脱：分2～3次共添加80 mL石油醚，用150 mL的旋转瓶接收，直到80 mL石油醚在重力作用下完全自然流出为止。
浓缩：将洗脱液在40～50 ℃旋转蒸发仪上浓缩至干。如果仍然有油滴无法蒸干，说明净化不完全，需要向油滴中添加80 mL的石油醚醚制得新样，取一根新柱重复上述净化过程。
定容：取2 mL乙腈四氢呋喃混合溶液（9+1）于旋转瓶中，混匀。
过膜：将上述混匀的待分析样品注入5 mL一次性注射器中，过0.22 μm的滤膜，装于2 mL进样瓶中，待上机分析。
1.4.3 色谱条件
色谱柱：美国Waters公司的Symmetry
C18柱
（250 mm×4.6 mm，5 ?m）
流动相：乙腈-水=88-12；
流速：1.0 mL/min；
柱温：30 ℃
进样量：10 ?L；
荧光检测器：激发波长384 nm，荧光波长405 nm
在上述条件下，测得苯并（a）芘保留时间在15 min左右，苯并（a）芘标准色谱图和芝麻油样品色谱图分别见图1和图2。
2 结果与讨论
2.1 线性关系
标准系列溶液在上述色谱条件下进行分析。以标准溶液质量浓度x（ng/mL）为横坐标，相应的峰面积y（EU）为纵坐标，作标准曲线如图3，得线性回归方程y=1.3677x+0.2065，R2=0.9997，表明苯并（a）芘在0.01-10.5 ng/mL质量浓度范围内和峰面积有很好的线性关系。苯并（a）芘标准溶液浓度值和峰面积值见表1。
2.2 样品测量值
分别使用自制的固相萃取柱柱和Cleanert BAP固相萃取柱对同一组芝麻油样品进行各10组平行样检测，检测结果如表2。
由表2中可见，使用自制的固相萃取柱和Cleanert BAP固相萃取柱检测苯（a）并芘的结果均在国标GB/T22509规定的误差范围内，但使用自制的固相萃取柱相对标准偏差RSD（%）大于Cleanert BAP固相萃取柱。
2.3 方法回收率
采用Cleanert BAP固相萃取柱做加标回收试验，加标量分别为2.1 ?g和4.2 ?g，每个加标进行5次平行试验，测得的回收率和相对标准偏差（RSD）见表3。
从表3中可见，回收率在91%～100.5%之间，相对标准偏差RSD是3.1%，方法的回收率和精密度均满足试验要求。
3 结语
该文采用市售的Cleanert BAP固相萃取柱，避免了原国标方法中人工处理填料和装填的繁琐过程，大大节约工作时间，提高了工作效率，同时市售的Cleanert BAP固相萃取柱避免了原方法中实验人员装填过程的误差和由此可能导致的结果不稳定性，因此具有更佳的回收率和重复性。同时本方法中称取的样量不适宜过大，最好不要超过0.3 g，否则容易造成净化不完全而必须进行二次净化。
参考文献
[1] 袁列江.动植物油脂中苯并（a）芘的测定 反相高效液相色谱法.
[2] 吴忠玲，何仲强，陈树东，等.植物油中苯并（a）芘含量的测定研究[J].广东微量元素科学，2012，19（6）：29-33.
[3] FALCON M S G，AMIGO S G，YUSTY M A L，et al. Determination of benzo （a） pyrene in some Spanish commercial smoked products by HPLC-FL[J].Food Additives and Contaminants，1999，16（1）：9-14.
[4] 胡传杰，沈黎炜高效液相色谱法测定肉制品中的苯并（a）芘[J].食品研究与开发，2010，31（6）：146-147.
[5] 王浩，刘艳琴，杨红梅，等.高效液相色谱法测定化妆品中的苯并（a）芘[J].分析实验室，2010，28（10）：221-222.
[6] GB/T22509-2008动植物油脂苯并（a）芘的测定-反相高效液相色谱法[S].中国标准出版社，2009.
关键词：苯并（a）芘 Cleanert BAP固相萃取柱 芝麻油 反相高效液相色谱法
中图分类号：O65 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2014）04（b）-0102-02
Sesame oil benzo （a） pyrene is determinated with reversed phase high performance liquid chromatographic method
DAI Qifeng XU Min
（HeXian technology of quality supervision in AnHui province，AnHui Maanshan，238200）
Abstract：Sesame oil benzo（a）pyrene is determinated with reversed phase high performance liquid chromatographic method， purged by Cleanert BAP Solid phase extraction column and Self-control Solid phase extraction column，detected by the fluorescence detector.The result shows that the reproducibility by Cleanert BAP Solid phase extraction column is better than by Self-control Solid phase extraction column，the tecoverie is range from 91% to 100.5%，the RSD is 3.1%.This is a good method that the operation is convenient and the result is accurate and reliable
Keywords：benzo（a）pyrene Cleanert BAP Solid phase extraction column sesame oil reversed phase high performance liquid chromatographic method
苯并（a）芘是由五个苯环构成的多环芳香烃物质，它和亚硝胺、黄曲霉毒素是世界公认的三大致癌物质。目前已发现的致癌性多环芳香烃及其致癌性的衍生物已达200多种[1]，多环芳香烃是一类含有多个苯环的芳香族化合物，是煤炭、木材、石油等有机物不完全燃烧的产物，多环芳香烃类化合物能阻断细胞间的联系，会导致癌细胞的进一步增殖扩散，这可能是多环芳香烃物质具有致癌性的原因之一。
芝麻油在生产过程中可能因环境污染或原材料带入或加工时温度过高而产生苯并（a）芘[2-5]，GB2716《食用植物油卫生标准》中明确规定了苯并（a）芘的限值为不大于10 μg/kg，所以苯并（a）芘的测定是食品检验机构最常见的检测项目之一，现在的国标方法GB/T22509-2008前处理较为繁锁，复杂的前处理不仅耗时耗力、污染环境，且容易引入较多的误差和不确定度，影响结果的准确性，因此建立一种快速准确和科学可靠的植物油中苯并（a）芘含量的检测方法具有积极的意义。
1 实验材料与方法
1.1 实验原理
样品经石油醚溶解，通过中性氧化铝固相萃取柱吸附，用石油醚试剂洗脱苯并（a）芘，采用反相高效液相色谱法分离，荧光检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量[6]。
1.2 试剂和材料
Cleanert BAP固相萃取柱：22g/60 mL
水：符合GB/T6682规定的二级水要求
甲醇：色谱纯
石油醚：色谱纯（沸程35～60 ℃）
乙腈：色谱纯
四氢呋喃：色谱纯
中性氧化铝：100-200目
无水硫酸钠：分析纯
苯并（a）芘标准溶液：5.25 ug/mL，2L/支，中国计量科学研究院制。
乙腈四氢呋喃混合溶液（9+1）：90 mL乙腈和10 mL四氢呋喃的混和溶液
芝麻油：辖区内监督抽查样品
1.3 仪器和器皿
Waters 2690高效液相色谱仪：配2475荧光检测器和120位自动进样器（美国沃特氏公司）
RE-52AA旋转蒸发仪：控温40～50 ℃范围内
VX200涡旋混合器：0～3000转
BS224S分析天平：感量为0.000 g
样品瓶：2 mL，配有可密封的盖子
1.4 实验方法
1.4.1 标准工作溶液的配制
将5.25 μg/mL的苯并（a）芘标准溶液用甲醇稀释到100 mL，配成105 ng/mL苯并（a）芘标准贮备液。再取105 ng/mL苯并（a）芘标准贮备溶液0 mL、1 mL、2 mL、4 mL、5 mL稀到50 mL，配成0 ng/mL、2.1 ng/mL、4.2 ng/mL、8.4 ng/mL、10.5 ng/mL的标准工作液。 1.4.2 样品前处理
溶解：用电子天平准确称取不超过0.300 g的油样，用5 mL的石油醚溶解并于涡旋混合器上充分混匀。
活化：用约30 mL石油醚，将固相萃取柱预先活化，活化过程直到固相萃取柱末端石油醚自然滴下约5 mL左右为止。
上样：将溶解好的油样添加到预先活化好的固相萃取柱中，注意操作过程中筛板不能干涸。
洗脱：分2～3次共添加80 mL石油醚，用150 mL的旋转瓶接收，直到80 mL石油醚在重力作用下完全自然流出为止。
浓缩：将洗脱液在40～50 ℃旋转蒸发仪上浓缩至干。如果仍然有油滴无法蒸干，说明净化不完全，需要向油滴中添加80 mL的石油醚醚制得新样，取一根新柱重复上述净化过程。
定容：取2 mL乙腈四氢呋喃混合溶液（9+1）于旋转瓶中，混匀。
过膜：将上述混匀的待分析样品注入5 mL一次性注射器中，过0.22 μm的滤膜，装于2 mL进样瓶中，待上机分析。
1.4.3 色谱条件
色谱柱：美国Waters公司的Symmetry
C18柱
（250 mm×4.6 mm，5 ?m）
流动相：乙腈-水=88-12；
流速：1.0 mL/min；
柱温：30 ℃
进样量：10 ?L；
荧光检测器：激发波长384 nm，荧光波长405 nm
在上述条件下，测得苯并（a）芘保留时间在15 min左右，苯并（a）芘标准色谱图和芝麻油样品色谱图分别见图1和图2。
2 结果与讨论
2.1 线性关系
标准系列溶液在上述色谱条件下进行分析。以标准溶液质量浓度x（ng/mL）为横坐标，相应的峰面积y（EU）为纵坐标，作标准曲线如图3，得线性回归方程y=1.3677x+0.2065，R2=0.9997，表明苯并（a）芘在0.01-10.5 ng/mL质量浓度范围内和峰面积有很好的线性关系。苯并（a）芘标准溶液浓度值和峰面积值见表1。
2.2 样品测量值
分别使用自制的固相萃取柱柱和Cleanert BAP固相萃取柱对同一组芝麻油样品进行各10组平行样检测，检测结果如表2。
由表2中可见，使用自制的固相萃取柱和Cleanert BAP固相萃取柱检测苯（a）并芘的结果均在国标GB/T22509规定的误差范围内，但使用自制的固相萃取柱相对标准偏差RSD（%）大于Cleanert BAP固相萃取柱。
2.3 方法回收率
采用Cleanert BAP固相萃取柱做加标回收试验，加标量分别为2.1 ?g和4.2 ?g，每个加标进行5次平行试验，测得的回收率和相对标准偏差（RSD）见表3。
从表3中可见，回收率在91%～100.5%之间，相对标准偏差RSD是3.1%，方法的回收率和精密度均满足试验要求。
3 结语
该文采用市售的Cleanert BAP固相萃取柱，避免了原国标方法中人工处理填料和装填的繁琐过程，大大节约工作时间，提高了工作效率，同时市售的Cleanert BAP固相萃取柱避免了原方法中实验人员装填过程的误差和由此可能导致的结果不稳定性，因此具有更佳的回收率和重复性。同时本方法中称取的样量不适宜过大，最好不要超过0.3 g，否则容易造成净化不完全而必须进行二次净化。
参考文献
[1] 袁列江.动植物油脂中苯并（a）芘的测定 反相高效液相色谱法.
[2] 吴忠玲，何仲强，陈树东，等.植物油中苯并（a）芘含量的测定研究[J].广东微量元素科学，2012，19（6）：29-33.
[3] FALCON M S G，AMIGO S G，YUSTY M A L，et al. Determination of benzo （a） pyrene in some Spanish commercial smoked products by HPLC-FL[J].Food Additives and Contaminants，1999，16（1）：9-14.
[4] 胡传杰，沈黎炜高效液相色谱法测定肉制品中的苯并（a）芘[J].食品研究与开发，2010，31（6）：146-147.
[5] 王浩，刘艳琴，杨红梅，等.高效液相色谱法测定化妆品中的苯并（a）芘[J].分析实验室，2010，28（10）：221-222.
[6] GB/T22509-2008动植物油脂苯并（a）芘的测定-反相高效液相色谱法[S].中国标准出版社，2009.