论文部分内容阅读
摘 要：采用超声法和索氏提取法对芦笋老茎中芦丁进行提取，高效液相色谱法对芦丁的含量进行测定。索氏提取法提取的芦丁含量高于超声法。高效液相色谱法方便、简单、快捷、准确，可用于芦笋老茎中芦丁含量测定。
关键词：芦笋；芦丁；索氏；超声；高效液相
芦丁，属于黄酮苷类化合物，又称芸香苷、槲皮苷，为淡黄色粉末或极细的淡黄色针状结晶，无臭无味。芦丁广泛用于医药、保健食品中，具有抗菌消炎、抗辐射、调节毛细血管壁的渗透和对紫外线具有极强的吸收以及很好的抗氧化等作用。芦笋，学名石刁柏，具有很高的营养保健价值，是一种食药兼用的名贵蔬菜。芦笋过了收获季节后有大量的老茎无法利用，其中含有丰富的黄酮类化合物。本课题研究用超声和索氏提取的方法，从芦笋老茎中提取芦丁，可为芦丁的提取提供新的资源和工艺，扩大芦笋老茎的综合利用，变废为宝。
1仪器与试剂
1.1仪器。美国Waters公司Waters2695高效液相色谱仪；Waters2996二极管阵列检测器；WatersXTerra?MSC18色谱柱（2.1mm×150mm3.5?m）；电子天平（上海恒平）；WK-1200A高速药物粉碎机（青州精诚）；0.45?m有机相滤膜（上海兴亚）；
1.2材料和试剂。芦笋（采集于秋季农田）；芦丁标准品（中国药品生物制品鉴定所）；甲醇为色谱醇（美国天地）；水为纯净水（娃哈哈纯净水经20℃超声处理）；石油醚（天津永大）；无水乙醇（天津广成）；石油醚、无水乙醇均为分析纯。
2实验方法与结果
2.1材料处理。芦笋老茎洗净，自然晾干后，置于干燥箱中60℃恒温干燥24h，称其总重量，再放入烘箱中继续干燥，反复称量至恒重，粉碎成粉末后保存备用。
2.2芦笋老茎中芦丁的提取
2.2.1去除色素。精密称取粉末10g，置索氏提取器中，加石油醚250ml，水浴回流提取5h，弃去石油醚液，将样品中残存的石油醚全部挥去。
2.2.2芦丁的提取。将样品分成两等份，每一份相当于原料5g。超声提取法提取：将另一份样品置具塞锥形瓶中，加无水乙醇30ml，超声提取2h，滤过，收集滤液，滤渣再加无水乙醇30ml，重复提取3次，合并滤液置500ml圆底烧瓶中，减压旋转蒸发。得样品1。索氏提取法提取：将其中一份样品加无水乙醇250ml，再置索氏提取器中提取5h，放凉，滤过，置500ml圆底烧瓶中，减压旋转蒸发。得样品2。
2.3样品含量测定
2.3.1对照品溶液的配制。精密称取芦丁对照品0.2mg，置10ml容量瓶中用甲醇定容至刻度，摇匀得芦丁对照品溶液0.02mg/ml。
2.3.2样品溶液的配制。向样品1和样品2圆底烧瓶中加入甲醇使样品溶解在甲醇中，滤过，微孔滤膜过滤，置50ml容量瓶中定容至刻度，摇匀得样品溶液0.1g/ml。
2.3.3色谱条件。采用XTerra?MSC18色譜柱（2.1mm×150mm×3.5?m）；流速：0.20ml/min；柱温：室温；波长扫描范围：260nm～280nm。Waters2996二极管阵列检测器；工作站：MassLynxV4.0系统；流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液梯度洗脱。
2.3.4标准曲线的测定。将芦丁对照品溶液0.02mg/ml配置成0.00125mg/ml，0.0025mg/l，0.005mg/ml，0.02mg/ml的溶液各2ml，过0.45m机相滤膜后置于4个进样瓶中，高效液相进样量为10 1，在紫外波长为260nm～280nm范围内扫描检测芦丁标准品溶液，测定峰面积分别为161987，330961，668672，2092391，4227087得芦丁标准品在0.0125～0.4g范围内线性关系良好，线性回归方程为Y=10339265.8x+74569.3，R=0.9995。
2.3.5最低检出限。将芦丁对照品溶液0.02mg/ml不断稀释，得到检测芦丁的最低浓度。S/N>3，最低检出限为0.05mg。
2.3.6稳定性试验。精密量取样品1溶液，分别于2h、12h、24h、36h、48h进样10 1，测定芦丁峰面积以考察样品溶液的稳定性，结果显示芦丁在10h内稳定，RSD=0.58%。
2.3.7加样回收试验。精密量取样品1和样品2溶液各3份，分别加入芦丁对照品溶液0.1mg，测得峰面积得出回收率为样品1为95.28%，样品2为98.54%。
2.3.8样品含量测定。取配制好的样品溶液2ml于进样瓶中，按色谱条件进样10 1，连续进样3次，得到峰面积算出含量样品1为1.126mg/g，样品2为1.726mg/g。
3讨论
3.1色谱条件的选择。根据文献报道芦丁在200～600nm的范围内进行扫描，在213nm、258nm、360nm处出现3个吸收峰，取标准品溶液于260～280nm区间内扫描，得出的主峰高，分离效果好。
梯度洗脱法可以改变流动相中各溶剂组成的比例，使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。很多文献报道是采用一种色谱体系，对于组分复杂的样品，很难得到理想的分离结果。要么分离时间太长，要么分离度太差。而在液相中采用梯度洗脱，可以缩短时间，提高柱效。
3.2超声法和索氏提取法的比较。超声波提取法是近年来药典收载应用较多的一种样品处理方法，具有提取效率高，处理时间短，操作简便等优点。索氏提取法是利用溶剂回流及虹吸原理，使固体物质连续不断地被纯溶剂萃取，既节约溶利萃取效率又高。但最大的不足就是耗时太长。本实验中采用索氏提取法提取的芦丁含量略高于超声法，由此可见索氏提取法在本实验中提取的芦丁含量高，方法较佳，且节省试剂。
4结论
使用高效液相色谱法测定芦笋老茎中芦丁含量，该方法快速、简便、准确、重复性好，结果可靠，超声法提取的芦丁含量为1.126mg/g，索氏提取法提取的芦丁含量为1.726mg/g。
芦丁是我国一种丰富的天然药物资源，我们在临床应用方面有着丰富的经验积累，从而为芦丁的开发奠定了良好的基础。面对目前芦丁在医药临床方面的巨大作用但原料不足的情况，我们从天然药物中提取芦丁，扩大芦丁的原料来源，更好的促进芦丁在心脑血管等方面的作用，改善人类的身体健康状况，具有巨大的现实意义。
参考文献：
[1]韩英华，秦元璋.芦丁研究现状[J].山东中医杂志，2003，22（22）：635-637.
[2]徐天玲.HPLC法测定百花膏中芦丁的含量[J].湖北中医杂志，2009，31（8）：73-74.
[3]姜虹玉，于军华，吕文海.槐角痔疮膏中芦丁的HPLC含量测定[J].中国实验方剂学杂志，2006，12（2）：18-20.
作者简介：
馬凯（1987—），男，本科，毕业院校泰山医学院，研究方向：分析检测工作。
关键词：芦笋；芦丁；索氏；超声；高效液相
芦丁，属于黄酮苷类化合物，又称芸香苷、槲皮苷，为淡黄色粉末或极细的淡黄色针状结晶，无臭无味。芦丁广泛用于医药、保健食品中，具有抗菌消炎、抗辐射、调节毛细血管壁的渗透和对紫外线具有极强的吸收以及很好的抗氧化等作用。芦笋，学名石刁柏，具有很高的营养保健价值，是一种食药兼用的名贵蔬菜。芦笋过了收获季节后有大量的老茎无法利用，其中含有丰富的黄酮类化合物。本课题研究用超声和索氏提取的方法，从芦笋老茎中提取芦丁，可为芦丁的提取提供新的资源和工艺，扩大芦笋老茎的综合利用，变废为宝。
1仪器与试剂
1.1仪器。美国Waters公司Waters2695高效液相色谱仪；Waters2996二极管阵列检测器；WatersXTerra?MSC18色谱柱（2.1mm×150mm3.5?m）；电子天平（上海恒平）；WK-1200A高速药物粉碎机（青州精诚）；0.45?m有机相滤膜（上海兴亚）；
1.2材料和试剂。芦笋（采集于秋季农田）；芦丁标准品（中国药品生物制品鉴定所）；甲醇为色谱醇（美国天地）；水为纯净水（娃哈哈纯净水经20℃超声处理）；石油醚（天津永大）；无水乙醇（天津广成）；石油醚、无水乙醇均为分析纯。
2实验方法与结果
2.1材料处理。芦笋老茎洗净，自然晾干后，置于干燥箱中60℃恒温干燥24h，称其总重量，再放入烘箱中继续干燥，反复称量至恒重，粉碎成粉末后保存备用。
2.2芦笋老茎中芦丁的提取
2.2.1去除色素。精密称取粉末10g，置索氏提取器中，加石油醚250ml，水浴回流提取5h，弃去石油醚液，将样品中残存的石油醚全部挥去。
2.2.2芦丁的提取。将样品分成两等份，每一份相当于原料5g。超声提取法提取：将另一份样品置具塞锥形瓶中，加无水乙醇30ml，超声提取2h，滤过，收集滤液，滤渣再加无水乙醇30ml，重复提取3次，合并滤液置500ml圆底烧瓶中，减压旋转蒸发。得样品1。索氏提取法提取：将其中一份样品加无水乙醇250ml，再置索氏提取器中提取5h，放凉，滤过，置500ml圆底烧瓶中，减压旋转蒸发。得样品2。
2.3样品含量测定
2.3.1对照品溶液的配制。精密称取芦丁对照品0.2mg，置10ml容量瓶中用甲醇定容至刻度，摇匀得芦丁对照品溶液0.02mg/ml。
2.3.2样品溶液的配制。向样品1和样品2圆底烧瓶中加入甲醇使样品溶解在甲醇中，滤过，微孔滤膜过滤，置50ml容量瓶中定容至刻度，摇匀得样品溶液0.1g/ml。
2.3.3色谱条件。采用XTerra?MSC18色譜柱（2.1mm×150mm×3.5?m）；流速：0.20ml/min；柱温：室温；波长扫描范围：260nm～280nm。Waters2996二极管阵列检测器；工作站：MassLynxV4.0系统；流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液梯度洗脱。
2.3.4标准曲线的测定。将芦丁对照品溶液0.02mg/ml配置成0.00125mg/ml，0.0025mg/l，0.005mg/ml，0.02mg/ml的溶液各2ml，过0.45m机相滤膜后置于4个进样瓶中，高效液相进样量为10 1，在紫外波长为260nm～280nm范围内扫描检测芦丁标准品溶液，测定峰面积分别为161987，330961，668672，2092391，4227087得芦丁标准品在0.0125～0.4g范围内线性关系良好，线性回归方程为Y=10339265.8x+74569.3，R=0.9995。
2.3.5最低检出限。将芦丁对照品溶液0.02mg/ml不断稀释，得到检测芦丁的最低浓度。S/N>3，最低检出限为0.05mg。
2.3.6稳定性试验。精密量取样品1溶液，分别于2h、12h、24h、36h、48h进样10 1，测定芦丁峰面积以考察样品溶液的稳定性，结果显示芦丁在10h内稳定，RSD=0.58%。
2.3.7加样回收试验。精密量取样品1和样品2溶液各3份，分别加入芦丁对照品溶液0.1mg，测得峰面积得出回收率为样品1为95.28%，样品2为98.54%。
2.3.8样品含量测定。取配制好的样品溶液2ml于进样瓶中，按色谱条件进样10 1，连续进样3次，得到峰面积算出含量样品1为1.126mg/g，样品2为1.726mg/g。
3讨论
3.1色谱条件的选择。根据文献报道芦丁在200～600nm的范围内进行扫描，在213nm、258nm、360nm处出现3个吸收峰，取标准品溶液于260～280nm区间内扫描，得出的主峰高，分离效果好。
梯度洗脱法可以改变流动相中各溶剂组成的比例，使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。很多文献报道是采用一种色谱体系，对于组分复杂的样品，很难得到理想的分离结果。要么分离时间太长，要么分离度太差。而在液相中采用梯度洗脱，可以缩短时间，提高柱效。
3.2超声法和索氏提取法的比较。超声波提取法是近年来药典收载应用较多的一种样品处理方法，具有提取效率高，处理时间短，操作简便等优点。索氏提取法是利用溶剂回流及虹吸原理，使固体物质连续不断地被纯溶剂萃取，既节约溶利萃取效率又高。但最大的不足就是耗时太长。本实验中采用索氏提取法提取的芦丁含量略高于超声法，由此可见索氏提取法在本实验中提取的芦丁含量高，方法较佳，且节省试剂。
4结论
使用高效液相色谱法测定芦笋老茎中芦丁含量，该方法快速、简便、准确、重复性好，结果可靠，超声法提取的芦丁含量为1.126mg/g，索氏提取法提取的芦丁含量为1.726mg/g。
芦丁是我国一种丰富的天然药物资源，我们在临床应用方面有着丰富的经验积累，从而为芦丁的开发奠定了良好的基础。面对目前芦丁在医药临床方面的巨大作用但原料不足的情况，我们从天然药物中提取芦丁，扩大芦丁的原料来源，更好的促进芦丁在心脑血管等方面的作用，改善人类的身体健康状况，具有巨大的现实意义。
参考文献：
[1]韩英华，秦元璋.芦丁研究现状[J].山东中医杂志，2003，22（22）：635-637.
[2]徐天玲.HPLC法测定百花膏中芦丁的含量[J].湖北中医杂志，2009，31（8）：73-74.
[3]姜虹玉，于军华，吕文海.槐角痔疮膏中芦丁的HPLC含量测定[J].中国实验方剂学杂志，2006，12（2）：18-20.
作者简介：
馬凯（1987—），男，本科，毕业院校泰山医学院，研究方向：分析检测工作。