论文部分内容阅读
利用逆转录病毒载体LXSN构建了含人TNFα基因的重组逆转录病毒载体L-tnfSN。磷酸钙沉淀法将重组载体引入病毒包装细胞PA317,挑选G418抗性克隆,用NIH3T3细胞测定病毒滴度,获得滴度为1×105CFU/ml的细胞克隆。应用这一重组病毒感染人肝癌细胞SMMC7721,经G418筛选获得抗性克隆。PCR可从转导的细胞DNA中扩增出TNFα基因片段,提示目的基因完整地整合在细胞基因组中。测定转导细胞培养上清中TNFα活性,结果显示TNFα有相对稳定的表达(150~370U/106cells/24小时)。实验还表明转导细胞的体外生长能力无明显变化,但是其在裸鼠中的致瘤性却明显降低,提示逆转录病毒介导TNFα基因对人原发性肝癌可能有一定的治疗作用。