探讨迷迭香酸(RA)对H9C2心肌细胞氧化应激损伤的影响。
方法采用过氧化氢(H2O2)处理建立氧化应激损伤模型,体外培养H9C2心肌细胞并随机分为对照组、H2O2组、H2O2+RA组。H2O2组采用400 μmol/L的H2O2处理4 h建立氧化应激损伤模型;H2O2+RA组在加入H2O2前分别用低剂量(5 μg/ml)、中剂量(10 μg/ml)、高剂量(20 μg/ml)的RA预处理24 h,CCK-8法检测H9C2心肌细胞存活率,DCFH-DA探针联合酶标仪检测细胞内反应活性氧(ROS)含量,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、细胞内丙二醛(MDA)含量以及过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,免疫印迹和实时荧光定量PCR分别检测还原性辅酶II氧化酶2(NOX2)、超氧化物歧化酶2(SOD2)以及凋亡相关基因Bax、Bcl-2、cleavage-caspase 3(c-cas 3)和caspase 3(cas 3)的表达情况;TUNEL试剂盒检测细胞凋亡水平。
结果(1)各H2O2组细胞活力均低于对照组,低浓度RA对细胞生长无抑制作用,但RA浓度过高(≥30 μg/ml)对H9C2心肌细胞的生长有明显的抑制作用;(2)与对照组相比,H2O2组细胞生存率下降52.9%,LDH漏出量增加73.8%,RA预处理可使细胞生存率升高、LDH漏出量减少,且这种保护作用随着RA浓度增加,更为显著;(3)与对照组相比,H2O2组细胞内氧化水平显著升高,MDA含量增加146.7%、ROS水平增加192.2%,RA预处理后,ROS产生显著减少,细胞内MDA含量下降,RA高浓度组的抑制作用更为显著;(4)与对照组相比,H2O2组细胞凋亡明显,RA预处理可改善H2O2诱导的凋亡水平,且高浓度组的改善程度更加明显。
结论RA对氧化应激条件下的H9C2心肌细胞具有明显的保护作用。