【摘 要】
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目的 探究补骨脂素对人牙周膜干细胞（hPDLSCs）成骨分化作用及可能机制。方法 利用酶消化法和有限稀释法体外分离并纯化hPDLSCs，流式细胞术鉴定细胞表型，成骨及成脂诱导检测细胞多向分化能力；取第3代hPDLSCs并分为对照组、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导组（10 ng/mL）、补骨脂素低（TNF-α 10 ng/mL+补骨脂素2μmol/L）、中（TNF-α 10 ng/mL+补骨脂素
【基金项目】
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2022年度河北省医学科学研究课题（20220956）；
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目的 探究补骨脂素对人牙周膜干细胞（hPDLSCs）成骨分化作用及可能机制。方法 利用酶消化法和有限稀释法体外分离并纯化hPDLSCs，流式细胞术鉴定细胞表型，成骨及成脂诱导检测细胞多向分化能力；取第3代hPDLSCs并分为对照组、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导组（10 ng/mL）、补骨脂素低（TNF-α 10 ng/mL+补骨脂素2μmol/L）、中（TNF-α 10 ng/mL+补骨脂素6μmol/L）、高（TNF-α 10 ng/mL+补骨脂素18μmol/L）剂量组，各组均利用成骨诱导培养液培养。7 d后，碱性磷酸酶（ALP）检测试剂盒检测ALP活性；RT-qPCR技术检测Runt相关转录因子2（Runx2）、锌指结构转录因子（Osx）、骨桥蛋白（OPN）、骨钙素（OCN）mRNA相对表达水平；Western blot技术检测Wnt3a、β-连环蛋白（β-catenin）、糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）、磷酸化糖原合成酶激酶3β（p-GSK-3β）、组织蛋白酶K（CTSK）蛋白相对表达水平；21 d后，茜素红染色及比色分析法检测钙沉积情况。结果 经细胞表型及分化能力鉴定，确定分离培养的细胞为hPDLSCs；经成骨化及炎性环境诱导后，与对照组比较，TNF-α诱导组、补骨脂素3个治疗组中ALP活性、矿化钙沉积吸光度值、Runx2、Osx、OPN及OCN mRNA相对表达水平、Wnt3a、β-catenin及p-GSK-3β蛋白相对表达水平降低，CTSK蛋白相对表达水平升高（P ＜0.05）；与TNF-α诱导组比较，补骨脂素3个治疗组中除CTSK蛋白相对表达水平降低外，其他上述指标水平均升高（P＜0.05）；补骨脂素作用效果呈剂量依赖性（P＜0.05）。结论 补骨脂素可促进炎性环境下hPDLSCs成骨分化，其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin轴下调CTSK蛋白表达有关。
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