内江猪IL-18基因的克隆及原核表达

来源 :现代生物医学进展 | 被引量 : 0次 | 上传用户：shi2879999

【摘要】

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以ConA刺激的内江猪外周血单核淋巴细胞（PBMC）为模板，采用RT-PCR技术扩增出猪IL-18全长基因，克隆其成熟蛋白的编码基因（471bp）至pMD18-T克隆载体，经双酶切和测序获得阳性克隆。通过E

【作者】

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张丽郭万柱李晓琪黄亚平李雯

【机构】

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四川农业大学动物生物技术中心

【出处】

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现代生物医学进展

【发表日期】

：

2007年7期

【关键词】

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内江猪白细胞介素18 原核表达 Neijiang swine Interleukin-18 gene Prokaryotic expression

【基金项目】

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国家“973”科研合作项目（2004CCA011800）,教育部长江学者和创新团队发展计划资助（IRT0555）.

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以ConA刺激的内江猪外周血单核淋巴细胞（PBMC）为模板，采用RT-PCR技术扩增出猪IL-18全长基因，克隆其成熟蛋白的编码基因（471bp）至pMD18-T克隆载体，经双酶切和测序获得阳性克隆。通过EcoRⅠ／XhoⅠ双酶切及连接反应，构建了pET-32a（＋）-IL-18原核表达质粒。经双酶切和DNA测序证实重组质粒构建正确，将阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，SDS-PAGE，Western-blot证实表达出35kD左右的融合蛋白。经实验确定重组内江猪IL-18蛋白

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