【摘 要】
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目的 研究Smad泛素化调节因子1(Smurf1)对基因重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)诱导成骨作用的影响.方法 通过将质粒pcDEF3-Smurf1临时转染C2C12细胞并应用实时PCR和Western免
【机 构】
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复旦大学附属中山医院骨科,上海,200032爱默里大学医学院骨科和脊柱外科中心,亚特兰大,佐治亚州,30329,美国;
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目的 研究Smad泛素化调节因子1(Smurf1)对基因重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)诱导成骨作用的影响.方法 通过将质粒pcDEF3-Smurf1临时转染C2C12细胞并应用实时PCR和Western免疫印迹法鉴定其表达Smurf1,空载体pcDNA3.1作为阴性对照;然后用比色法测定细胞碱性磷酸酶活性和实时PCR分析细胞碱性磷酸酶、骨钙素、成骨转录因子Osterix基因表达,观察Smurf1对rhBMP-2诱导C2C12细胞向成骨细胞分化的影响.同时在相差显微镜下观察细胞形态的变化.结果 Smurf1在C2C12细胞可以通过临时转染获得很好的表达.尽管在细胞形态上没有明显的差别,但Smurf1转染的C2C12细胞在rhBMP-2作用48 h后,细胞碱性磷酸酶活性以及细胞碱性磷酸酶、骨钙素、成骨转录因子Osterix基因表达均较对照组明显下降.结论 Smurf1在BMP诱导成骨过程中发挥着负性调节作用.
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