【摘 要】
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目的 探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)介导的内皮祖细胞外泌体(EPCs-Exos)对高糖受损内皮细胞(ECs)增殖和凋亡的影响.方法 从足月健康新生儿脐带血中分离、培养单个核细胞,用CD31抗体联
【机 构】
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湖南中医药大学,湖南 长沙410208;湖南中医药大学 第一附属医院,烧伤整形外科,湖南 长沙410007;湖南中医药大学 第一附属医院,重症医学科,湖南 长沙410007;湖南中医药大学 第一附属医
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目的 探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)介导的内皮祖细胞外泌体(EPCs-Exos)对高糖受损内皮细胞(ECs)增殖和凋亡的影响.方法 从足月健康新生儿脐带血中分离、培养单个核细胞,用CD31抗体联合4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)核染鉴定,获得的EPCs用100 mg·L-1 AS-Ⅳ干预24 h.用超速离心法结合超滤法提取细胞上清液中囊泡结构,用透射电子显微镜进行形态观察,用蛋白质印迹(WB)法检测外泌体表面特征性标志蛋白CD9、CD63、CD81.体外分离、培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),用vWF因子联合DAPI核染鉴定,获得的HUVECs用30 mmol·L-1葡萄糖干预120 h,随机分为实验组、对照组并设置正常组(用正常EGM-2培养基预培养120 h).实验组用AS-IV介导下的EPCs-Exos处理24 h,对照组和正常组用等容量PBS处理24 h,用CCK-8细胞增殖检测试剂盒,用流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况.结果 正常组、对照组和实验组OD值分别为0.73±0.00,0.45±0.00和0.74±0.01,凋亡率分别为(6.44±0.27)％,(24.41±1.12)％和(9.54±0.20)％.各组细胞凋亡率比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 高糖环境下ECs增殖能力抑制明显、凋亡率上升,而AS-IV介导的EPCs-Exos可显著促进高糖受损ECs增殖并抑制其凋亡,对ECs有明确的保护作用.
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